作者tynse71864 (TATA box)
看板Biotech
標題[求救] Digitonin配置
時間Wed Nov 21 18:02:35 2018
各位版大好:
小的目前使用 Digitonin粉末 (Sigma-D141),
並回溶在 ddH2O 中。
由於實驗設計，無法配在 DMSO 或 EtOH 中
當初是按照別篇 paper的步驟，加熱95度10分鐘後，粉末全溶後分裝，也在暫放4度冰箱後?
我是想請問:
1.每次要使用前，都必須重新95度加熱以溶解沉澱嗎? 或是放置室溫一段時間即可
2. 凍在-20度大概可以放多久呢? 還是其實可以放4度即可?
這東西stock配起來有2ml , 我每次只會用1ul阿……是否建議分裝凍，用個兩三次就扔一管
希望有使用過的版友能分享一些心得
謝謝各位!
-----
Sent from JPTT on my Sony G3125.
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.136.253.35
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1542794558.A.1AB.html
1F：→ xxtomnyxx: Digitonin 超難搞的，看能不能直接買 commercial 配好11/22 01:12
2F：→ xxtomnyxx: 的 solution 吧11/22 01:12
不過買配好的溶液，放冰箱還是一樣會沉澱吧?
※ 編輯: tynse71864 (223.137.77.51), 11/22/2018 19:32:44
3F：→ Ice9: 1、我是放到室溫使用。2、建議stock放-20°C。剛配置完就分 11/25 18:19
4F：→ Ice9: 裝，用PCR的小管子裝10~20ul。解凍過後放4°C。久未用則丟。11/25 18:21
謝謝 ice大! 想請問你的久是一個月左右嗎?或是更短呢? 謝謝
※ 編輯: tynse71864 (223.140.178.46), 11/25/2018 21:51:48
5F：→ Ice9: 約一到兩星期。大多是十天左右吧。 12/04 03:09
6F：推 tommy770726: Digitonin很穩定 配5-10%放eppendorf存在4度冰箱 12/04 14:40
7F：→ tommy770726: 要用前微波10-20秒看微波爐功率 比加熱融的快不用到 12/04 14:40
8F：→ tommy770726: 95度就會全融了 它是固醇衍生物很穩定只怕被微生物吃 12/04 14:42
9F：→ tommy770726: 我也是買了一小瓶破菌用了兩年還沒用完 12/04 14:44
10F：→ xxtomnyxx: 最近要回頭試 Digitonin，因而查到一個有趣的 protocol 12/28 20:20
11F：→ xxtomnyxx: ，這個 protocol 寫把 1g Digitonin 溶到 20 mL 水裡， 12/28 20:21
12F：→ xxtomnyxx: 加熱到 95~98 度等他完全溶解後，放到 4 度至少 2 天， 12/28 20:21
13F：→ xxtomnyxx: 之後把沉澱物過濾掉，這樣的 Digitonin 是 5% 的溶液。 12/28 20:22
14F：→ xxtomnyxx: 所以說對這個 protocol 來說，那些在 4 度沉澱出來的東 12/28 20:23
15F：→ xxtomnyxx: 西不是 Digitonin 而是雜質？ 12/28 20:23
16F：→ tynse71864: x 大我好像看過你說protocol, 他好像是說市售digitoni 12/30 18:05
17F：→ tynse71864: n像是個混合物，需要回溶過濾或是再結晶析出的樣子？ 12/30 18:05
18F：→ tynse71864: 總之我試用2/3樓的建議，目前做 IF 染色結果還算一致 12/30 18:06
19F：→ tynse71864: ，也有預期的結果 12/30 18:06
20F：→ xxtomnyxx: Sigma 賣的兩種 digitonin 都不是純的，一個直接標明是 12/30 22:06
21F：→ xxtomnyxx: ~50% (D5628)，另一個要輸入貨號去查才知道 (D141)，我 12/30 22:07
22F：→ xxtomnyxx: 的 digitonin 是要拿來做 co-IP 的，純度對我的影響可 12/30 22:07
23F：→ xxtomnyxx: 能很大，我手上的 digitonin (D141) 這管輸入貨號去查 12/30 22:09
24F：→ xxtomnyxx: 他寫是 77.4%。我在想需不需要去測試去掉或不去掉沉澱 12/30 22:10
25F：→ xxtomnyxx: 拿來做 co-IP 的結果如何，雖然我最後是要打 MASS 找未 12/30 22:11
26F：→ xxtomnyxx: 知的 interaction protein，不過有已知的 protein 可以 12/30 22:12
27F：→ xxtomnyxx: 用來做 co-IP 成功與否以及效率的 assay 12/30 22:12
28F：→ xxtomnyxx: 話說，我的 digitonin 買來的直接加水都會先完全溶解， 12/30 22:13
29F：→ xxtomnyxx: 連加熱都不用就溶得乾乾淨淨，要在 4 度放一陣子後才會 12/30 22:13
30F：→ xxtomnyxx: 有沉澱，我還很納悶為什麼網路上都說要加熱溶解.... 12/30 22:14
31F：→ xxtomnyxx: Preparation of Water-Soluble Digitonin 12/30 22:22
33F：→ tynse71864: 咦D141就那2ml 包裝那管嘛！ 我加水沒溶欸……還是有9 01/08 01:35
34F：→ tynse71864: 5度水加熱 01/08 01:35
※ 編輯: tynse71864 (114.136.202.89), 03/21/2019 21:46:34