作者tynse71864 (TATA box)
看板Biotech
标题[求救] Digitonin配置
时间Wed Nov 21 18:02:35 2018
各位版大好:
小的目前使用 Digitonin粉末 (Sigma-D141),
并回溶在 ddH2O 中。
由於实验设计，无法配在 DMSO 或 EtOH 中
当初是按照别篇 paper的步骤，加热95度10分钟後，粉末全溶後分装，也在暂放4度冰箱後?
我是想请问:
1.每次要使用前，都必须重新95度加热以溶解沉淀吗? 或是放置室温一段时间即可
2. 冻在-20度大概可以放多久呢? 还是其实可以放4度即可?
这东西stock配起来有2ml , 我每次只会用1ul阿……是否建议分装冻，用个两三次就扔一管
希望有使用过的版友能分享一些心得
谢谢各位!
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1F：→ xxtomnyxx: Digitonin 超难搞的，看能不能直接买 commercial 配好11/22 01:12
2F：→ xxtomnyxx: 的 solution 吧11/22 01:12
不过买配好的溶液，放冰箱还是一样会沉淀吧?
※ 编辑: tynse71864 (223.137.77.51), 11/22/2018 19:32:44
3F：→ Ice9: 1、我是放到室温使用。2、建议stock放-20°C。刚配置完就分 11/25 18:19
4F：→ Ice9: 装，用PCR的小管子装10~20ul。解冻过後放4°C。久未用则丢。11/25 18:21
谢谢 ice大! 想请问你的久是一个月左右吗?或是更短呢? 谢谢
※ 编辑: tynse71864 (223.140.178.46), 11/25/2018 21:51:48
5F：→ Ice9: 约一到两星期。大多是十天左右吧。 12/04 03:09
6F：推 tommy770726: Digitonin很稳定 配5-10%放eppendorf存在4度冰箱 12/04 14:40
7F：→ tommy770726: 要用前微波10-20秒看微波炉功率 比加热融的快不用到 12/04 14:40
8F：→ tommy770726: 95度就会全融了 它是固醇衍生物很稳定只怕被微生物吃 12/04 14:42
9F：→ tommy770726: 我也是买了一小瓶破菌用了两年还没用完 12/04 14:44
10F：→ xxtomnyxx: 最近要回头试 Digitonin，因而查到一个有趣的 protocol 12/28 20:20
11F：→ xxtomnyxx: ，这个 protocol 写把 1g Digitonin 溶到 20 mL 水里， 12/28 20:21
12F：→ xxtomnyxx: 加热到 95~98 度等他完全溶解後，放到 4 度至少 2 天， 12/28 20:21
13F：→ xxtomnyxx: 之後把沉淀物过滤掉，这样的 Digitonin 是 5% 的溶液。 12/28 20:22
14F：→ xxtomnyxx: 所以说对这个 protocol 来说，那些在 4 度沉淀出来的东 12/28 20:23
15F：→ xxtomnyxx: 西不是 Digitonin 而是杂质？ 12/28 20:23
16F：→ tynse71864: x 大我好像看过你说protocol, 他好像是说市售digitoni 12/30 18:05
17F：→ tynse71864: n像是个混合物，需要回溶过滤或是再结晶析出的样子？ 12/30 18:05
18F：→ tynse71864: 总之我试用2/3楼的建议，目前做 IF 染色结果还算一致 12/30 18:06
19F：→ tynse71864: ，也有预期的结果 12/30 18:06
20F：→ xxtomnyxx: Sigma 卖的两种 digitonin 都不是纯的，一个直接标明是 12/30 22:06
21F：→ xxtomnyxx: ~50% (D5628)，另一个要输入货号去查才知道 (D141)，我 12/30 22:07
22F：→ xxtomnyxx: 的 digitonin 是要拿来做 co-IP 的，纯度对我的影响可 12/30 22:07
23F：→ xxtomnyxx: 能很大，我手上的 digitonin (D141) 这管输入货号去查 12/30 22:09
24F：→ xxtomnyxx: 他写是 77.4%。我在想需不需要去测试去掉或不去掉沉淀 12/30 22:10
25F：→ xxtomnyxx: 拿来做 co-IP 的结果如何，虽然我最後是要打 MASS 找未 12/30 22:11
26F：→ xxtomnyxx: 知的 interaction protein，不过有已知的 protein 可以 12/30 22:12
27F：→ xxtomnyxx: 用来做 co-IP 成功与否以及效率的 assay 12/30 22:12
28F：→ xxtomnyxx: 话说，我的 digitonin 买来的直接加水都会先完全溶解， 12/30 22:13
29F：→ xxtomnyxx: 连加热都不用就溶得乾乾净净，要在 4 度放一阵子後才会 12/30 22:13
30F：→ xxtomnyxx: 有沉淀，我还很纳闷为什麽网路上都说要加热溶解.... 12/30 22:14
31F：→ xxtomnyxx: Preparation of Water-Soluble Digitonin 12/30 22:22
33F：→ tynse71864: 咦D141就那2ml 包装那管嘛！ 我加水没溶欸……还是有9 01/08 01:35
34F：→ tynse71864: 5度水加热 01/08 01:35
※ 编辑: tynse71864 (114.136.202.89), 03/21/2019 21:46:34