作者freedomk0115 (賊賊)
看板Biotech
標題[求救] ClaI digestion 怎麼樣就是切不動！
時間Fri Nov 9 11:26:54 2018
這大概是我cloning以來
遇見最詭異的事了
我要用 Cla I 切我的 plasmid
https://www.neb.com/products/r0197-clai#Product%20Information
但他是dam sensitve的enzyme
所以我有transform到GM21635 strain中（dam-/dcm-）
http://si.secda.info/yb_md/?page_id=1380
還特地拿去sequence
是有ClaI的cutting site序列的
*還一度懷疑是不是enzyme的問題
但後續有跟廠商要postive control
但最後確定enzyme是有活性的
跪求解 是不是我還有什麼地方沒有注意到？
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1F：推 patricksky: 能否詳細敘述你做的實驗細節? 不然無法幫你判斷 11/09 15:32
2F：→ blence: ClaI不是設計用在cloning的,你是因為map不適合再自己找的? 11/09 17:29
3F：→ Ianthegood: 你有看neb的note嗎 11/10 02:01
4F：推 oceanl: 有遇過ClaI一直切不動的情況 不確定是methylation還是其他 11/10 04:25
5F：→ oceanl: 因素 建議改用別的限制酶切位 11/10 04:25
6F：→ Campanella: 遇到跟樓上一樣的情況 11/10 09:09
7F：→ Ice9: 其他切位切得動嗎？ 11/11 03:58
8F：推 chenmick: 你有幾個切位？band應該要多大？ 11/12 19:36
9F：推 andy544asd: 先找另一個Dam敏感的RE測試是否真的是Dam- cell 11/19 09:08