作者freedomk0115 (贼贼)
看板Biotech
标题[求救] ClaI digestion 怎麽样就是切不动！
时间Fri Nov 9 11:26:54 2018
这大概是我cloning以来
遇见最诡异的事了
我要用 Cla I 切我的 plasmid
https://www.neb.com/products/r0197-clai#Product%20Information
但他是dam sensitve的enzyme
所以我有transform到GM21635 strain中（dam-/dcm-）
http://si.secda.info/yb_md/?page_id=1380
还特地拿去sequence
是有ClaI的cutting site序列的
*还一度怀疑是不是enzyme的问题
但後续有跟厂商要postive control
但最後确定enzyme是有活性的
跪求解 是不是我还有什麽地方没有注意到？
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1F：推 patricksky: 能否详细叙述你做的实验细节? 不然无法帮你判断 11/09 15:32
2F：→ blence: ClaI不是设计用在cloning的,你是因为map不适合再自己找的? 11/09 17:29
3F：→ Ianthegood: 你有看neb的note吗 11/10 02:01
4F：推 oceanl: 有遇过ClaI一直切不动的情况 不确定是methylation还是其他 11/10 04:25
5F：→ oceanl: 因素 建议改用别的限制酶切位 11/10 04:25
6F：→ Campanella: 遇到跟楼上一样的情况 11/10 09:09
7F：→ Ice9: 其他切位切得动吗？ 11/11 03:58
8F：推 chenmick: 你有几个切位？band应该要多大？ 11/12 19:36
9F：推 andy544asd: 先找另一个Dam敏感的RE测试是否真的是Dam- cell 11/19 09:08