作者loveshe331 (penny)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質透析
時間Wed Nov 7 09:35:29 2018
各位大家好
這幾天再趕著純化透析我的目標蛋白
星期五就要餵小鼠了
但在透析時遇到了很大的問題
透析前可能5.600mg/ml
透析後卻測不太到濃度
我的蛋白分子量約為12.13kD
透析的方式有使用透析袋或濃縮離心管透析
透析袋的MWCO為3500 離心管的話則是3000
透析buffer則是pH7的50 mM PB buffer
透析前蛋白則溶在含300mM imidazole 的elution buffer
這幾天嘗試了好幾次
最先是用PBS以濃縮離心管透析 發現有沉澱的問題
後來改成PB 以肉眼看是看不太出沉澱
故之後都以PB作為透析buffer
但透析的效果還是很差很差
另外想再請教一下
若不透析直接用含有imidazole的樣品
管餵到小鼠體內 是不是會造成小鼠身體的損傷？
再麻煩大家回覆了 謝謝
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1F：推 rasaze: 500mg/ml 的濃度好高阿... 11/07 11:32
2F：→ milkpa: 做SEC看看 11/07 12:02
3F：推 Ianthegood: 500??? 確定不是imidazole的signal?? 11/08 20:44
4F：→ loveshe331: 結果真的是imidazole的背景值很高... 謝謝各位囉 11/09 09:40
5F：→ turtle24: 500mg/ml比芝麻糊還稠啊，你以為戚家上下十三口..(誤 11/09 11:15
6F：→ loveshe331: 我現在才發現我打錯了...是microliter 不好意思@@ 11/10 00:12
7F：→ Ianthegood: mg/ul????? 看到這個單位你還覺得是你的東西嗎? 這個 11/10 01:59
8F：→ Ianthegood: 濃度都要結成脫水晶了吧 11/10 01:59
9F：→ loveshe331: microgram啦 天阿我在幹嘛.... 11/10 18:14
10F：→ IFN113: 如果小鼠吃的不是目標蛋白而是滿滿的imidazole感覺也怪怪 01/11 03:40
11F：→ IFN113: 的@@" 不然要多加一隻專門吃imidazole的小鼠當ctrl 01/11 03:40