作者loveshe331 (penny)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质透析
时间Wed Nov 7 09:35:29 2018
各位大家好
这几天再赶着纯化透析我的目标蛋白
星期五就要喂小鼠了
但在透析时遇到了很大的问题
透析前可能5.600mg/ml
透析後却测不太到浓度
我的蛋白分子量约为12.13kD
透析的方式有使用透析袋或浓缩离心管透析
透析袋的MWCO为3500 离心管的话则是3000
透析buffer则是pH7的50 mM PB buffer
透析前蛋白则溶在含300mM imidazole 的elution buffer
这几天尝试了好几次
最先是用PBS以浓缩离心管透析 发现有沉淀的问题
後来改成PB 以肉眼看是看不太出沉淀
故之後都以PB作为透析buffer
但透析的效果还是很差很差
另外想再请教一下
若不透析直接用含有imidazole的样品
管喂到小鼠体内 是不是会造成小鼠身体的损伤？
再麻烦大家回覆了 谢谢
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1F：推 rasaze: 500mg/ml 的浓度好高阿... 11/07 11:32
2F：→ milkpa: 做SEC看看 11/07 12:02
3F：推 Ianthegood: 500??? 确定不是imidazole的signal?? 11/08 20:44
4F：→ loveshe331: 结果真的是imidazole的背景值很高... 谢谢各位罗 11/09 09:40
5F：→ turtle24: 500mg/ml比芝麻糊还稠啊，你以为戚家上下十三口..(误 11/09 11:15
6F：→ loveshe331: 我现在才发现我打错了...是microliter 不好意思@@ 11/10 00:12
7F：→ Ianthegood: mg/ul????? 看到这个单位你还觉得是你的东西吗? 这个 11/10 01:59
8F：→ Ianthegood: 浓度都要结成脱水晶了吧 11/10 01:59
9F：→ loveshe331: microgram啦 天阿我在干嘛.... 11/10 18:14
10F：→ IFN113: 如果小鼠吃的不是目标蛋白而是满满的imidazole感觉也怪怪 01/11 03:40
11F：→ IFN113: 的@@" 不然要多加一只专门吃imidazole的小鼠当ctrl 01/11 03:40