作者his198995 (心好痛)
看板Biotech
標題[求救] 請問western跑純化 chimera protein
時間Fri Oct 26 18:54:19 2018
舉例實驗跑純化的AB chimera protein，為確認protein位置有放control，分別是
A protein和AB chimera protein，但在lane(AB chimera protein)上有跑出一個
A protein 的band和AB chimera protein的band，想知道為什麼。
大家有跑SDS-PAGE先配好膠放冰箱冰overnight後膠跑得比較漂亮的經驗嗎?
大家對這有沒有任何邏輯想法
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1F：→ z27wi:糟糕 硬的是拳頭03/24 23:15
2F：→ wei1120: 濕的是眼眶03/24 23:32
3F：推 xxxx5566: 乾的是輸精管03/24 23:52
4F：推 heliosheep64: 軟的是樓下小牙籤03/24 23:56
5F：→ DareJ: 大家好我是軟今天03/24 23:57
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6F：推 july81212: 習慣SDS-PAGE 現配現跑 ；Native冰overnight 先pre-ru 10/26 20:28
7F：→ july81212: n一段再load sample 跑 10/26 20:28
8F：推 july81212: 然後可能就AB control protein 不純 10/26 20:33
9F：→ july81212: 先前純化拿時有在跑SEC 確定是單一蛋白嗎 10/26 20:33
10F：→ Ianthegood: 兩個protein的activity是什麼? 10/26 22:30
11F：→ xxtomnyxx: 前面的問題需要知道你的蛋白質怎麼純化的，以及你的 10/26 22:48
12F：→ xxtomnyxx: western 是用什麼樣的抗體。 10/26 22:48
13F：→ xxtomnyxx: 後面的問題，有一個可能，據說就算 PAGE 已經凝固，其 10/26 22:49
14F：→ xxtomnyxx: 時分子層面上也還沒有完全 polymerized，放個 o/n 之後 10/26 22:49
15F：→ xxtomnyxx: 可能因為 PAGE 已經完全 polymerized 所以跑比較好看 10/26 22:50
16F：→ xxtomnyxx: 純粹猜測 10/26 22:50
17F：→ his198995: IL21R Fc 10/27 00:17
18F：→ ganbaba: 感覺是Fc掉下來了 10/27 09:09
19F：→ xxtomnyxx: 我也覺得可能是 Fc 掉下來了 10/27 18:10
20F：→ Ianthegood: 有必要就過個gel filtration吧 探究原因不一定有幫助 10/27 18:37
21F：推 tynse71864: gel 會丟一個晚上/ 但趕時間就丟一小時 RT 10/27 20:18
22F：推 westernblot5: 冰overnight都蠻好看的 但我是做好了整片膠隔天直 12/29 01:28
23F：→ westernblot5: 接嘍蛋白 不知道你的配好了是指膠體還是只是液體 12/29 01:28