作者ai760721 (~方吉~)
看板Biotech
標題[求救] 收anaphase的細胞
時間Mon Oct 8 16:25:37 2018
各位前輩好
小弟目前在做跟細胞核染色體有關的實驗
老闆前陣子要求要看細胞核在mitosis的過程會不會產生異常
主要是在MEF上將某個基因knock-out之後
將細胞種在蓋玻片上 (有用poly-L-Lysine coating過)
然後隔天直接固定染DAPI
但是我怎麼收一整個蓋玻片上都只有少數幾顆在anaphase
因為老闆說至少要算到幾百顆
所以想上來請教一下各位前輩
如何收到較多的anaphase的細胞呢?
謝謝~
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1F：→ xxtomnyxx: 用 inhibitor 把細胞停在特定時期。如果怕 inhibitor 10/08 20:07
2F：→ xxtomnyxx: 會直接影響分裂造成實驗上的問題，就試試先把細胞同步 10/08 20:08
3F：→ xxtomnyxx: 在 S 或是 G2 phase，理論上到時應該會有大量細胞同時 10/08 20:09
4F：→ xxtomnyxx: 進 anaphase 10/08 20:09
5F：→ turtle24: KO的比例也許沒有預期的高 10/09 11:37
6F：→ turtle24: 看你實驗的控制組怎麼設計來判讀結果 10/09 11:38
7F：→ ai760721: KO的部分是有做過IF跟western確認過應該沒問題，然後細 10/09 16:48
8F：→ ai760721: 胞本身分裂週期大概是30小時，老師的意思應該是就算是沒 10/09 16:48
9F：→ ai760721: 有KO的細胞應該也要收的到幾百顆anaphase 10/09 16:48
10F：→ blence: "沒有KO的細胞應該也要收的到幾百顆anaphase" 10/09 17:12
11F：→ blence: 看起來這老師不喜歡synchronize...照比例應該要觀察上萬顆 10/09 17:13
12F：→ blence: 才能湊到幾百顆anaphase細胞 10/09 17:13
13F：推 GG810424: 建議先讓細胞同步（synchronize)，算好時間週期，染DAPI 10/17 02:49
14F：→ GG810424: 同時請記得也染anaphase 的marker 證明你收到的是anapha 10/17 02:49
15F：→ GG810424: se 的細胞。 10/17 02:49