作者ai760721 (~方吉~)
看板Biotech
标题[求救] 收anaphase的细胞
时间Mon Oct 8 16:25:37 2018
各位前辈好
小弟目前在做跟细胞核染色体有关的实验
老板前阵子要求要看细胞核在mitosis的过程会不会产生异常
主要是在MEF上将某个基因knock-out之後
将细胞种在盖玻片上 (有用poly-L-Lysine coating过)
然後隔天直接固定染DAPI
但是我怎麽收一整个盖玻片上都只有少数几颗在anaphase
因为老板说至少要算到几百颗
所以想上来请教一下各位前辈
如何收到较多的anaphase的细胞呢?
谢谢~
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1F：→ xxtomnyxx: 用 inhibitor 把细胞停在特定时期。如果怕 inhibitor 10/08 20:07
2F：→ xxtomnyxx: 会直接影响分裂造成实验上的问题，就试试先把细胞同步 10/08 20:08
3F：→ xxtomnyxx: 在 S 或是 G2 phase，理论上到时应该会有大量细胞同时 10/08 20:09
4F：→ xxtomnyxx: 进 anaphase 10/08 20:09
5F：→ turtle24: KO的比例也许没有预期的高 10/09 11:37
6F：→ turtle24: 看你实验的控制组怎麽设计来判读结果 10/09 11:38
7F：→ ai760721: KO的部分是有做过IF跟western确认过应该没问题，然後细 10/09 16:48
8F：→ ai760721: 胞本身分裂周期大概是30小时，老师的意思应该是就算是没 10/09 16:48
9F：→ ai760721: 有KO的细胞应该也要收的到几百颗anaphase 10/09 16:48
10F：→ blence: "没有KO的细胞应该也要收的到几百颗anaphase" 10/09 17:12
11F：→ blence: 看起来这老师不喜欢synchronize...照比例应该要观察上万颗 10/09 17:13
12F：→ blence: 才能凑到几百颗anaphase细胞 10/09 17:13
13F：推 GG810424: 建议先让细胞同步（synchronize)，算好时间周期，染DAPI 10/17 02:49
14F：→ GG810424: 同时请记得也染anaphase 的marker 证明你收到的是anapha 10/17 02:49
15F：→ GG810424: se 的细胞。 10/17 02:49