最近要分離 mouse 的 腹腔內 的neutrophils 是完全參照current protocol : isolation of mouse neutrophils 的步驟進行 casein soulution 的配製 將9 g casein 分次(因casein 難溶解 故須分次加入) 加入 80℃ 100 ml. PBS (含 Ca / Mg) 待casein 加完溶解完後 使 PBS 沸騰 (boiling) 後 autoclaved 125℃ 1h 過程敘述及結果: casein 真的很難溶解 加熱攪拌 只是呈現混濁狀 乳白色液體 第一次配 不小心 配到一半 PBS 沸騰 整個 粉糊狀的casein 變成膏狀 重新再配一次 攪拌了一個小時 停止攪拌後 下半部還是可以看到粉狀物質 拿去autocleaved 後 底部呈現淡粉色 膏狀 上半部則是澄清液體 問題 1. 請問哪裡步驟有問題? 2. 看一些國外論壇 a. casein 濃度沒有到 這麼高 b. 好像比較多是配在water中 c. 也有提到 casein 難溶 所以通常會 加 NaOH d. 有看到別人提出相似的步驟及結果(粉色膏狀) 但沒有後續討論 用water配 與用PBS 配其滲透壓不同 打進小鼠腹腔會不會有影響 用NaOH 使溶液偏鹼 需要再用HCl 滴定至中性嗎 但滴定至偏中性 casein不會再析出(?)嗎? 也有看到有人說 不能讓液體沸騰 這樣要如何滅菌@@ 最後請問 casein solution 到底要如何配製 先謝謝大家了 ps. 手機打字 排版醜 請見諒 --

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