最近要分离 mouse 的 腹腔内 的neutrophils 是完全参照current protocol : isolation of mouse neutrophils 的步骤进行 casein soulution 的配制 将9 g casein 分次(因casein 难溶解 故须分次加入) 加入 80℃ 100 ml. PBS (含 Ca / Mg) 待casein 加完溶解完後 使 PBS 沸腾 (boiling) 後 autoclaved 125℃ 1h 过程叙述及结果: casein 真的很难溶解 加热搅拌 只是呈现混浊状 乳白色液体 第一次配 不小心 配到一半 PBS 沸腾 整个 粉糊状的casein 变成膏状 重新再配一次 搅拌了一个小时 停止搅拌後 下半部还是可以看到粉状物质 拿去autocleaved 後 底部呈现淡粉色 膏状 上半部则是澄清液体 问题 1. 请问哪里步骤有问题? 2. 看一些国外论坛 a. casein 浓度没有到 这麽高 b. 好像比较多是配在water中 c. 也有提到 casein 难溶 所以通常会 加 NaOH d. 有看到别人提出相似的步骤及结果(粉色膏状) 但没有後续讨论 用water配 与用PBS 配其渗透压不同 打进小鼠腹腔会不会有影响 用NaOH 使溶液偏硷 需要再用HCl 滴定至中性吗 但滴定至偏中性 casein不会再析出(?)吗? 也有看到有人说 不能让液体沸腾 这样要如何灭菌@@ 最後请问 casein solution 到底要如何配制 先谢谢大家了 ps. 手机打字 排版丑 请见谅 --

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