作者tynse71864 (TATA box)
看板Biotech
標題[求救] siRNA transfection
時間Sat Aug 4 20:50:05 2018
手機輸入排版請見諒
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我的實驗:
想把Target protein siRNA 送入 Jurkat T Cell中, 看這個 gene KD 後的影響
大部分paper都是用 電轉染的方式
但一次電就得用掉 2nmol siRNA
(Dharmacon 是5nmol 22000NT……)
有點太過噴錢
而我在網頁上有看到一些廠商
Viromer blue/Genmute說明可以 transfect siRNA 到Jurkat中，
而且都號稱有高效率
想請問是否有使用過的前輩能提供資訊呢?
或是電轉染根本不用那麼多 siRNA ?
謝謝
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1F：→ xxtomnyxx: 這部份我不熟，很抱歉給不了幫的上忙的意見，但是我還08/04 22:25
2F：→ xxtomnyxx: 是得說一句：作研究怕花錢是成不了事的。08/04 22:26
3F：推 qiet: 看看廠商有沒有試用的08/05 00:57
4F：推 joseph103331: 也可以試試看電質體比較便宜 或是用Lenti感染08/05 11:35
5F：→ joseph103331: Lenti不想篩藥就用螢光蛋白質去篩08/05 11:36
其實同時有用三條 shRNA (已包成病毒)去分別感染
但篩藥一週後看起來是沒有KD效果…
(我用 wb 去看) 所以才會想改用 sirna
而且我已經花一個月在等這三個 shRNA了，沒那麼多時間等下一個…
6F：推 poison7202: KD效率差，別忽略了這一條shRNA可能KD不夠好，測試一08/05 15:28
7F：→ poison7202: 下比較好唷！08/05 15:28
8F：→ xxtomnyxx: 我超討厭做 shRNA vector，可能做 5 個只有 1 個有用..08/05 16:49
9F：→ blence: 沒有在其它細胞先試過transfection efficiency?08/05 17:49
10F：→ blence: 阿，我是要說KD efficiency08/05 17:54
我自己沒有拿其他細胞試過，會在用293試試看
別人的 paper用同樣的 shRNA ,在 Hela 跟 primary fibroblast大概都有90% KD
11F：→ blence: paper來的,所以是addgene買的/要來的,還是找人代工接嗎？08/05 18:28
12F：→ blence: 我覺得如果1.control viral GFP vector在jurkat效率夠好08/05 18:35
13F：→ blence: 加上2.在其它細胞測試過KD效率可以;那應該不需更改設計08/05 18:35
shRNA是TCRN系列，請RNAi core 協助包成病毒的
我沒有GFP virus，只有scramble;
但不論是scramble 或是target組, infect完puro藥篩 存活率有8-9成 (沒感染的全死
所以送進去的效率應該是好的
※ 編輯: tynse71864 (140.109.113.67), 08/05/2018 20:48:06
14F：推 kuror: 有試過Dharmafect嗎? 有查到可以送Jurket細胞，而且送一次08/07 10:55
15F：→ kuror: 只需100uM 5nMol的siRNA應該非常夠用才是08/07 10:56
剛從家裡冰箱翻到……
可能順便測試 RNAiMAX / Genmute
有 data會在回報的，感謝大家
※ 編輯: tynse71864 (223.137.121.177), 08/07/2018 13:42:46