作者tynse71864 (TATA box)
看板Biotech
标题[求救] siRNA transfection
时间Sat Aug 4 20:50:05 2018
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我的实验:
想把Target protein siRNA 送入 Jurkat T Cell中, 看这个 gene KD 後的影响
大部分paper都是用 电转染的方式
但一次电就得用掉 2nmol siRNA
(Dharmacon 是5nmol 22000NT……)
有点太过喷钱
而我在网页上有看到一些厂商
Viromer blue/Genmute说明可以 transfect siRNA 到Jurkat中，
而且都号称有高效率
想请问是否有使用过的前辈能提供资讯呢?
或是电转染根本不用那麽多 siRNA ?
谢谢
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1F：→ xxtomnyxx: 这部份我不熟，很抱歉给不了帮的上忙的意见，但是我还08/04 22:25
2F：→ xxtomnyxx: 是得说一句：作研究怕花钱是成不了事的。08/04 22:26
3F：推 qiet: 看看厂商有没有试用的08/05 00:57
4F：推 joseph103331: 也可以试试看电质体比较便宜 或是用Lenti感染08/05 11:35
5F：→ joseph103331: Lenti不想筛药就用萤光蛋白质去筛08/05 11:36
其实同时有用三条 shRNA (已包成病毒)去分别感染
但筛药一周後看起来是没有KD效果…
(我用 wb 去看) 所以才会想改用 sirna
而且我已经花一个月在等这三个 shRNA了，没那麽多时间等下一个…
6F：推 poison7202: KD效率差，别忽略了这一条shRNA可能KD不够好，测试一08/05 15:28
7F：→ poison7202: 下比较好唷！08/05 15:28
8F：→ xxtomnyxx: 我超讨厌做 shRNA vector，可能做 5 个只有 1 个有用..08/05 16:49
9F：→ blence: 没有在其它细胞先试过transfection efficiency?08/05 17:49
10F：→ blence: 阿，我是要说KD efficiency08/05 17:54
我自己没有拿其他细胞试过，会在用293试试看
别人的 paper用同样的 shRNA ,在 Hela 跟 primary fibroblast大概都有90% KD
11F：→ blence: paper来的,所以是addgene买的/要来的,还是找人代工接吗？08/05 18:28
12F：→ blence: 我觉得如果1.control viral GFP vector在jurkat效率够好08/05 18:35
13F：→ blence: 加上2.在其它细胞测试过KD效率可以;那应该不需更改设计08/05 18:35
shRNA是TCRN系列，请RNAi core 协助包成病毒的
我没有GFP virus，只有scramble;
但不论是scramble 或是target组, infect完puro药筛 存活率有8-9成 (没感染的全死
所以送进去的效率应该是好的
※ 编辑: tynse71864 (140.109.113.67), 08/05/2018 20:48:06
14F：推 kuror: 有试过Dharmafect吗? 有查到可以送Jurket细胞，而且送一次08/07 10:55
15F：→ kuror: 只需100uM 5nMol的siRNA应该非常够用才是08/07 10:56
刚从家里冰箱翻到……
可能顺便测试 RNAiMAX / Genmute
有 data会在回报的，感谢大家
※ 编辑: tynse71864 (223.137.121.177), 08/07/2018 13:42:46