作者fishg1216 (葉綠體)
看板Biotech
標題[求救] 求過表現載體影響農桿菌轉殖效率之paper
時間Tue May 22 19:31:35 2018
各位仍辛苦為實驗與論文奮鬥的同學或前輩，大家好!
之前做番茄轉殖，以10天大子葉為培植體，分別轉殖兩個基因A、B，
A是以35S啟動子過表現，B是以自身的啟動子去表現。
但我發現A不論是培殖體再生率或轉殖率皆遠低於B。
因此，我在想是不是基因過表現的關係影響農桿菌活性進而造成此種差異。
為了佐證我的想法
我在Google學術搜尋不論輸入agrobacterium、transformation efficiency、
overexpression等關鍵字仍找不到相關的paper。
所以想尋求有做植物基因轉殖的大大們是否有看到這類的文獻，
可否張貼文獻名稱供我查閱，
感激不盡!!!
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1F：→ Ianthegood: 35s沒那麼強 確認你的vector沒錯, protein有in frame, 05/22 23:40
2F：→ Ianthegood: codon usage有看? protein有沒有毒性? 抽過RNA看expr 05/22 23:40
3F：→ Ianthegood: ession沒有? 都確認過再來看奇怪的假設 05/22 23:40
4F：→ fishg1216: 載體是二元載體pGA482G 05/23 01:00
5F：→ fishg1216: A蛋白是Hsp40,應該無毒性。因為兩基因之前都轉過菸草， 05/23 01:08
6F：→ fishg1216: 在轉殖上沒有那麼大差異，轉殖株外觀與WT也無太大差別 05/23 01:08
7F：→ fishg1216: 沒看番茄RNA表現，但學長菸草轉殖株RNA都有顯著增加 05/23 01:16
8F：→ Ianthegood: 我如果是你我如果要趕畢業不會花時間來看這個東西, 05/23 02:14
9F：→ Ianthegood: 畢竟我只需要一個clone, efficiency再低我也沒差. 你 05/23 02:14
10F：→ Ianthegood: 真的要看的話得用同樣的基因(可能還得多幾個)掛兩個 05/23 02:14
11F：→ Ianthegood: 不同的promoter以外可能還得做truncation/rescue實驗. 05/23 02:14
12F：→ Ianthegood: 老實講我覺得比較有可能是你這個cultivar的番茄莫名 05/23 02:15
13F：→ Ianthegood: 對hsp40敏感之類的 05/23 02:15
14F：→ fishg1216: 謝謝l大，或許這也是一個原因。 05/23 22:21
15F：推 hank99911: 通常表現載體不太effect轉殖率，比較有可能的是蛋白本 09/26 09:08
16F：→ hank99911: 身的問題，如果兩個基因在同一個載體上表現不同通常猜 09/26 09:08
17F：→ hank99911: 的都是蛋白本身的特性 09/26 09:08