作者ai760721 (~方吉~)
看板Biotech
標題[求救] adenovirus amplify
時間Fri May 11 08:21:55 2018
各位前輩好
小弟最近在amplify Adenovirus
步驟是將買來的病毒(有GFP) infect到293T
觀察細胞全亮且大約8-9成飄起來的時候
離心將細胞離下來, 上清液取出備用
這時候可以觀察到細胞pellet是有綠綠Der
然後加100ul PBS回溶pellet, 接著液態氮-37度水浴槽冷凍解凍五次
然後再離心收上清液，分裝凍-80
但是再解凍出來infect細胞的時候
titer都超低阿阿阿!!!!
老師說他以前這樣做可以收到 10^10 pfu/ul
目前想破頭只想到可能是不能用液態氮去冷凍解凍
想請問各位前輩還有可能是哪一步出了問題??
感激不盡!!!!
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1F：→ turtle24: 我這邊是用乾冰+MeOH 解凍三次 05/11 10:27
2F：→ turtle24: 去年最後一次做 2x10^9 05/11 10:29
3F：→ ai760721: 順便問一下您儲存的時候會加10% Glycerol還是DMSO嗎? 05/11 10:57
4F：推 joseph103331: 可以試試看用新鮮的上清作感染測試,就知道是不是 05/11 13:42
5F：→ joseph103331: 保存的問題囉 05/11 13:43
6F：→ Ianthegood: 凍-80有先用液態氮炸嗎 05/11 15:01
7F：→ ai760721: 就用液態氮冷凍解凍完取上清液直接凍-80 05/11 15:49
8F：→ turtle24: 只有medium 沒加抗凍成分 05/11 23:43
9F：→ Ianthegood: 忽然想到重複冷凍解凍似乎很多protein會掛掉 05/12 02:53
10F：→ Ianthegood: 不能用其他方式破嗎？ 05/12 02:54
11F：推 joseph103331: 之前在研究virus release的方法,可以用dounce的 05/12 11:40
12F：→ joseph103331: 不過後來沒試過效果就是 05/12 11:41
13F：推 mandychou: 每ul10的10次方，不濃縮怎麼可能 05/28 13:30