作者ai760721 (~方吉~)
看板Biotech
标题[求救] adenovirus amplify
时间Fri May 11 08:21:55 2018
各位前辈好
小弟最近在amplify Adenovirus
步骤是将买来的病毒(有GFP) infect到293T
观察细胞全亮且大约8-9成飘起来的时候
离心将细胞离下来, 上清液取出备用
这时候可以观察到细胞pellet是有绿绿Der
然後加100ul PBS回溶pellet, 接着液态氮-37度水浴槽冷冻解冻五次
然後再离心收上清液，分装冻-80
但是再解冻出来infect细胞的时候
titer都超低阿阿阿!!!!
老师说他以前这样做可以收到 10^10 pfu/ul
目前想破头只想到可能是不能用液态氮去冷冻解冻
想请问各位前辈还有可能是哪一步出了问题??
感激不尽!!!!
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1F：→ turtle24: 我这边是用乾冰+MeOH 解冻三次 05/11 10:27
2F：→ turtle24: 去年最後一次做 2x10^9 05/11 10:29
3F：→ ai760721: 顺便问一下您储存的时候会加10% Glycerol还是DMSO吗? 05/11 10:57
4F：推 joseph103331: 可以试试看用新鲜的上清作感染测试,就知道是不是 05/11 13:42
5F：→ joseph103331: 保存的问题罗 05/11 13:43
6F：→ Ianthegood: 冻-80有先用液态氮炸吗 05/11 15:01
7F：→ ai760721: 就用液态氮冷冻解冻完取上清液直接冻-80 05/11 15:49
8F：→ turtle24: 只有medium 没加抗冻成分 05/11 23:43
9F：→ Ianthegood: 忽然想到重复冷冻解冻似乎很多protein会挂掉 05/12 02:53
10F：→ Ianthegood: 不能用其他方式破吗？ 05/12 02:54
11F：推 joseph103331: 之前在研究virus release的方法,可以用dounce的 05/12 11:40
12F：→ joseph103331: 不过後来没试过效果就是 05/12 11:41
13F：推 mandychou: 每ul10的10次方，不浓缩怎麽可能 05/28 13:30