作者darkfiredark (黑火)
看板Biotech
標題[求救] 細胞離心失敗& flow cytometry
時間Mon Apr 16 20:58:12 2018
各位大大好，小弟最近剛踏入生物領域，
日前在把細胞切下來後，拿去離心機離心
其中有一管一直離不下來，會有像是絲狀物
卡在中央或在中下區域
1.用的是15mltube(裝到14ml)
2.400g 3分鐘 (失敗後又在離2次，結果一樣)
3.用的是 eppendorf 5810R，離心的時候，指標停在braking(是不是理論上應該要在accleration)
4.在離心前，細胞已經有一些絲狀沉澱
還有額外一個問題，大家在做flow cytometry 都是用幾盤細胞下去做?
做做細胞計數前，大家都怎麼把細胞打散均勻?
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1F：推 joseph103331: 首先先確認離心機有沒有轉,可以增加一點離心時間 04/17 09:56
2F：→ joseph103331: 大概5min左右, 拿出來倒掉上清, 先用手輕彈離心管 04/17 09:57
3F：→ joseph103331: 至沉澱散開, 再加適量的培養基用pipet的方式打散 04/17 09:58
4F：→ joseph103331: 要吸吐幾下看細胞種類, 可以從計數器的均勻程度判斷 04/17 09:59
感謝大大建議
5F：→ tynse71864: 切下細胞後有加入含血清的培養基再離心嗎? 有時候加的 04/17 19:45
我沒有在加培養基
6F：→ tynse71864: 量太少會這樣 ；建議是加入3倍以上 trypsin體積的培養 04/17 19:45
7F：→ tynse71864: 基做中和 04/17 19:45
8F：→ tynse71864: acc只是顯示加速度多少吧，braking是指離心停止時會有 04/17 19:50
9F：→ tynse71864: 摩擦力去提升降速 04/17 19:50
10F：→ tynse71864: 離心機有沒有轉摸一下外殼應該就知道了 04/17 19:50
※ 編輯: darkfiredark (24.61.246.185), 04/18/2018 07:40:53
11F：推 joseph103331: 切完以後一定要加培養基中和trypsin，也有人加10倍 04/18 11:21
12F：→ joseph103331: PBS稀釋，作用過頭細胞雖不會破，但會因為表面蛋白 04/18 11:21
13F：→ joseph103331: 消失不再貼附，也會死掉。 04/18 11:21
14F：→ joseph103331: 為免誤會解釋一下，是10倍體積的PBS~ 04/18 11:21
15F：推 MDCCLXXVI: 絲狀沈澱應該是細胞被切爛了 04/18 14:22
16F：推 shinink: 絲狀也有可能是細胞太滿 切下來聚集成絲狀 04/19 02:46
基本上是因為這樣，拿到顯微鏡下看，絲狀物確實有著一堆細胞
※ 編輯: darkfiredark (24.61.246.185), 04/20/2018 08:07:55
17F：→ xxtomnyxx: 可是會變成絲狀通常就是有細胞破掉了，DNA跑出來把細胞 04/20 18:01
18F：→ xxtomnyxx: 纏在一起，不然只要pipet幾次應該還是會散掉 04/20 18:01
19F：推 greenmoon00: Flow部分,不同實驗需求的細胞數不太一樣,先看看你要 04/23 08:47
20F：→ greenmoon00: 做啥？ 04/23 08:47
21F：推 greatime: Trypsin 過頭了，做用完一定要快一點加入含FBS的medium 04/29 00:53
22F：→ greatime: 或FBS，怕打不散就用大量PBS稀釋，重點是要快，來不及就 04/29 00:53
23F：→ greatime: 一次不要處理超過兩盤細胞 04/29 00:53