作者darkfiredark (黑火)
看板Biotech
标题[求救] 细胞离心失败& flow cytometry
时间Mon Apr 16 20:58:12 2018
各位大大好，小弟最近刚踏入生物领域，
日前在把细胞切下来後，拿去离心机离心
其中有一管一直离不下来，会有像是丝状物
卡在中央或在中下区域
1.用的是15mltube(装到14ml)
2.400g 3分钟 (失败後又在离2次，结果一样)
3.用的是 eppendorf 5810R，离心的时候，指标停在braking(是不是理论上应该要在accleration)
4.在离心前，细胞已经有一些丝状沉淀
还有额外一个问题，大家在做flow cytometry 都是用几盘细胞下去做?
做做细胞计数前，大家都怎麽把细胞打散均匀?
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1F：推 joseph103331: 首先先确认离心机有没有转,可以增加一点离心时间 04/17 09:56
2F：→ joseph103331: 大概5min左右, 拿出来倒掉上清, 先用手轻弹离心管 04/17 09:57
3F：→ joseph103331: 至沉淀散开, 再加适量的培养基用pipet的方式打散 04/17 09:58
4F：→ joseph103331: 要吸吐几下看细胞种类, 可以从计数器的均匀程度判断 04/17 09:59
感谢大大建议
5F：→ tynse71864: 切下细胞後有加入含血清的培养基再离心吗? 有时候加的 04/17 19:45
我没有在加培养基
6F：→ tynse71864: 量太少会这样 ；建议是加入3倍以上 trypsin体积的培养 04/17 19:45
7F：→ tynse71864: 基做中和 04/17 19:45
8F：→ tynse71864: acc只是显示加速度多少吧，braking是指离心停止时会有 04/17 19:50
9F：→ tynse71864: 摩擦力去提升降速 04/17 19:50
10F：→ tynse71864: 离心机有没有转摸一下外壳应该就知道了 04/17 19:50
※ 编辑: darkfiredark (24.61.246.185), 04/18/2018 07:40:53
11F：推 joseph103331: 切完以後一定要加培养基中和trypsin，也有人加10倍 04/18 11:21
12F：→ joseph103331: PBS稀释，作用过头细胞虽不会破，但会因为表面蛋白 04/18 11:21
13F：→ joseph103331: 消失不再贴附，也会死掉。 04/18 11:21
14F：→ joseph103331: 为免误会解释一下，是10倍体积的PBS~ 04/18 11:21
15F：推 MDCCLXXVI: 丝状沈淀应该是细胞被切烂了 04/18 14:22
16F：推 shinink: 丝状也有可能是细胞太满 切下来聚集成丝状 04/19 02:46
基本上是因为这样，拿到显微镜下看，丝状物确实有着一堆细胞
※ 编辑: darkfiredark (24.61.246.185), 04/20/2018 08:07:55
17F：→ xxtomnyxx: 可是会变成丝状通常就是有细胞破掉了，DNA跑出来把细胞 04/20 18:01
18F：→ xxtomnyxx: 缠在一起，不然只要pipet几次应该还是会散掉 04/20 18:01
19F：推 greenmoon00: Flow部分,不同实验需求的细胞数不太一样,先看看你要 04/23 08:47
20F：→ greenmoon00: 做啥？ 04/23 08:47
21F：推 greatime: Trypsin 过头了，做用完一定要快一点加入含FBS的medium 04/29 00:53
22F：→ greatime: 或FBS，怕打不散就用大量PBS稀释，重点是要快，来不及就 04/29 00:53
23F：→ greatime: 一次不要处理超过两盘细胞 04/29 00:53