作者ai760721 (~方吉~)
看板Biotech
標題[求救] 細胞IF固定
時間Thu Apr 12 16:33:28 2018
各位前輩好
我最近要做算細胞染色體數目的實驗
之前實驗室留下來的protocol是加秋水仙素O/N之後
泡低張溶液然後用Methanl:Acetic acid = 3:1的固定液去固定
接著滴片染DAPI
但是我老闆因為怕滴片滴的不好不容易計算染色體數目
所以買了一隻CENPB的抗體來做IF再染DAPI想說會比較好計算
於是乎我滴完片之後就直接接著原本IF固定完後的protocol做
發現完全染不出來
原本IF的protocol是用4%PFA固定
之前也有先用不是metaphase的細胞測試這隻抗體照原本的protocol做是可以染出來的
所以不知道是不是因為固定液不同的關係
還是說我在收metaphase的細胞的時候可以改用4%PFA試試看?
麻煩各位前輩解惑
謝謝
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1F：推 joseph103331: 用Methanol固定的原因是? 04/12 16:44
2F：→ e104582001: 有protocol是用methanol固定，我個人覺得效果不是很好 04/12 18:45
3F：→ e104582001: 就是了 04/12 18:46
4F：→ ai760721: 我們實驗室留下來收metaphase cell用的固定液就是Carnoy 04/12 19:25
5F：→ ai760721: 's fixative, 我其實不太知道是不是能換。所以上來問問 04/12 19:25
6F：→ ai760721: 看有沒有對這比較熟的前輩能不能換成4%PFA固定 04/12 19:25
7F：推 joseph103331: 所以想不到不行的原因那就試試看囉XD 04/12 20:23
8F：→ joseph103331: PFA固定以後染色時要多做permeable這步 04/12 20:24
9F：→ joseph103331: 平行測試看誰比較美比較好數 04/12 20:25
10F：→ xxtomnyxx: 我做 IF 都是 PFA 故洞，然後用 methanol 打洞 XD 04/12 20:34
11F：推 joseph103331: 借問一下樓上Methanol打洞的條件XD 我都用Triton... 04/12 23:26
12F：→ xxtomnyxx: 100% methanol(放冰箱)，加到細胞後放-20 度 10 分鐘 04/13 16:32
13F：→ tynse71864: Meoh打完洞後建議 PBS洗個5分鐘 04/14 20:34