作者ai760721 (~方吉~)
看板Biotech
标题[求救] 细胞IF固定
时间Thu Apr 12 16:33:28 2018
各位前辈好
我最近要做算细胞染色体数目的实验
之前实验室留下来的protocol是加秋水仙素O/N之後
泡低张溶液然後用Methanl:Acetic acid = 3:1的固定液去固定
接着滴片染DAPI
但是我老板因为怕滴片滴的不好不容易计算染色体数目
所以买了一只CENPB的抗体来做IF再染DAPI想说会比较好计算
於是乎我滴完片之後就直接接着原本IF固定完後的protocol做
发现完全染不出来
原本IF的protocol是用4%PFA固定
之前也有先用不是metaphase的细胞测试这只抗体照原本的protocol做是可以染出来的
所以不知道是不是因为固定液不同的关系
还是说我在收metaphase的细胞的时候可以改用4%PFA试试看?
麻烦各位前辈解惑
谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.125.32
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1523522011.A.887.html
1F：推 joseph103331: 用Methanol固定的原因是? 04/12 16:44
2F：→ e104582001: 有protocol是用methanol固定，我个人觉得效果不是很好 04/12 18:45
3F：→ e104582001: 就是了 04/12 18:46
4F：→ ai760721: 我们实验室留下来收metaphase cell用的固定液就是Carnoy 04/12 19:25
5F：→ ai760721: 's fixative, 我其实不太知道是不是能换。所以上来问问 04/12 19:25
6F：→ ai760721: 看有没有对这比较熟的前辈能不能换成4%PFA固定 04/12 19:25
7F：推 joseph103331: 所以想不到不行的原因那就试试看罗XD 04/12 20:23
8F：→ joseph103331: PFA固定以後染色时要多做permeable这步 04/12 20:24
9F：→ joseph103331: 平行测试看谁比较美比较好数 04/12 20:25
10F：→ xxtomnyxx: 我做 IF 都是 PFA 故洞，然後用 methanol 打洞 XD 04/12 20:34
11F：推 joseph103331: 借问一下楼上Methanol打洞的条件XD 我都用Triton... 04/12 23:26
12F：→ xxtomnyxx: 100% methanol(放冰箱)，加到细胞後放-20 度 10 分钟 04/13 16:32
13F：→ tynse71864: Meoh打完洞後建议 PBS洗个5分钟 04/14 20:34