作者shinchenboy (欣承男孩)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質gel用commassie blue沒染出東西
時間Wed Jan 24 11:31:37 2018
各位大大們好
小弟最近在做蛋白質分析的實驗
初步要先使用SDS-PAGE電泳觀察分子量的分佈
我先做好蛋白質的定量後開始跑電泳
濃度約位在500ug/ml上下
沒個well我大約loading 10ul
等到差不多都跑開後
用coomassie blue R250染色約30分鐘
之後開始用退色液退色
我發現
我的膠片完全沒有染出任何的蛋白質啊!!!!!
有大大們了解可能的原因在哪嗎？？？
理論上我濃度測出來的量應該要可以在膠片上看的到染色吧!?!?
蛋白質也95度加熱過了
還是sample的酸鹼值會去影響跑電泳嗎？？？
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1F：→ tynse71864: 你的蛋白來源? 另外5ug沒有很多吧 01/24 11:57
2F：→ blence: 每個well,濃度,分子量分布,這些字加起來就不像跑單一蛋白 01/24 12:57
3F：→ blence: 理論上是要用marker,而且要先知道R250 sensitivity 01/24 13:01
4F：→ cyc5566: loading量過少，至少加到20ug 01/24 13:43
5F：→ turtle24: marker有染到嗎? 同一瓶R250最近有人染過嗎? 01/24 18:57
6F：→ joseph103331: loading個梯度吧,然後拿個BSA當正控制組檢查試劑 01/24 19:51
7F：→ joseph103331: 當然能問實驗室的人就問,那樣比較快 01/24 19:51
8F：→ Ianthegood: 你的蛋白來源跟測的方法？每種方法都有不喜歡的污染 01/25 04:07
9F：→ Ianthegood: 物 01/25 04:07
10F：→ shinchenboy: 我們是想把頭髮裡的蛋白質萃出來 萃取中會加入H2O2 01/25 12:23
11F：→ shinchenboy: 當作氧化劑來斷雙硫鍵 但萃取後雙氧水不知怎麼去除 01/25 12:23
12F：→ shinchenboy: 老闆就叫我先跑電泳看看 跑的時候有用BSA當control 01/25 12:23
13F：→ shinchenboy: BSA有染出來 但我要看的蛋白質沒有 01/25 12:23
14F：推 Ianthegood: 那就是沒有萃出來啊 你的protein quantitation method 01/25 19:02
15F：→ Ianthegood: 大概不喜歡h2o2 01/25 19:02
16F：→ blence: 有種瞎子摸象的無奈.... 01/25 22:23
17F：→ shinchenboy: 可是測吸光的結果濃度是有的欸 01/26 15:29
18F：推 tynse71864: 你測吸光的kit能夠承受該濃度的 H2o2嗎 如果不行則該 01/26 19:55
19F：→ tynse71864: 數值與實際會有出入 01/26 19:55