作者shinchenboy (欣承男孩)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质gel用commassie blue没染出东西
时间Wed Jan 24 11:31:37 2018
各位大大们好
小弟最近在做蛋白质分析的实验
初步要先使用SDS-PAGE电泳观察分子量的分布
我先做好蛋白质的定量後开始跑电泳
浓度约位在500ug/ml上下
没个well我大约loading 10ul
等到差不多都跑开後
用coomassie blue R250染色约30分钟
之後开始用退色液退色
我发现
我的胶片完全没有染出任何的蛋白质啊!!!!!
有大大们了解可能的原因在哪吗？？？
理论上我浓度测出来的量应该要可以在胶片上看的到染色吧!?!?
蛋白质也95度加热过了
还是sample的酸硷值会去影响跑电泳吗？？？
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1F：→ tynse71864: 你的蛋白来源? 另外5ug没有很多吧 01/24 11:57
2F：→ blence: 每个well,浓度,分子量分布,这些字加起来就不像跑单一蛋白 01/24 12:57
3F：→ blence: 理论上是要用marker,而且要先知道R250 sensitivity 01/24 13:01
4F：→ cyc5566: loading量过少，至少加到20ug 01/24 13:43
5F：→ turtle24: marker有染到吗? 同一瓶R250最近有人染过吗? 01/24 18:57
6F：→ joseph103331: loading个梯度吧,然後拿个BSA当正控制组检查试剂 01/24 19:51
7F：→ joseph103331: 当然能问实验室的人就问,那样比较快 01/24 19:51
8F：→ Ianthegood: 你的蛋白来源跟测的方法？每种方法都有不喜欢的污染 01/25 04:07
9F：→ Ianthegood: 物 01/25 04:07
10F：→ shinchenboy: 我们是想把头发里的蛋白质萃出来 萃取中会加入H2O2 01/25 12:23
11F：→ shinchenboy: 当作氧化剂来断双硫键 但萃取後双氧水不知怎麽去除 01/25 12:23
12F：→ shinchenboy: 老板就叫我先跑电泳看看 跑的时候有用BSA当control 01/25 12:23
13F：→ shinchenboy: BSA有染出来 但我要看的蛋白质没有 01/25 12:23
14F：推 Ianthegood: 那就是没有萃出来啊 你的protein quantitation method 01/25 19:02
15F：→ Ianthegood: 大概不喜欢h2o2 01/25 19:02
16F：→ blence: 有种瞎子摸象的无奈.... 01/25 22:23
17F：→ shinchenboy: 可是测吸光的结果浓度是有的欸 01/26 15:29
18F：推 tynse71864: 你测吸光的kit能够承受该浓度的 H2o2吗 如果不行则该 01/26 19:55
19F：→ tynse71864: 数值与实际会有出入 01/26 19:55