作者boy12345761 (boson)
看板Biotech
標題[討論] cell cycle 累積是否等於細胞生長被抑
時間Wed Nov 15 14:30:07 2017
想請問板上各位大大
最近在做藥物濃度的測試
因為實驗室的cck8沒了
老師要我直接去做單染PI
他說這樣子可以看藥物在某個濃度下
出現的細胞週期某一期累積
就可以順便看細胞生長抑制
我不太懂細胞週期累積會等於生長抑制
而看了很多paper
都是先做cck再做cell cycle
想請問這兩者可以從cell cycle去推cell proliferation嗎？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.9.162.119
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1510727409.A.278.html
1F：→ Ed860227: 細胞週期有所謂的checkpoint ,當你的藥物可以抑制cdk等11/15 19:50
2F：→ Ed860227: 相關蛋白 ,你的細胞就會大部分停留在某一期,這也代表你11/15 19:50
3F：→ Ed860227: 的細胞無法進行分裂11/15 19:50
4F：→ blence: 你應該要對CCK8與PI的機制或原理有一定程度的瞭解,11/15 21:26
5F：→ blence: 而不是只會用cell proliferation這麼籠統的稱乎11/15 21:26
6F：→ blence: 至於最後一句,只要不上FLOW,答案都是否定的11/15 21:31
對這兩個我都了解，但我不太懂的是，flow的圖是靜態的，怎麼可以確定大部分細胞停留
在某一期，就代表不會進行細胞分裂，甚至是細胞週期的速度，因為我並不知道下個時間
點的細胞週期狀況
※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 11:16:38
7F：→ kuror: 與control相比，就會知道正常情況下細胞週期的分布，加藥後11/16 12:20
8F：→ kuror: 如果細胞週期分布改變，就可推論是藥物影響細胞週期的速度11/16 12:21
9F：→ kuror: 當細胞週期花費時間不同，生長也會受到影響11/16 12:21
但如果說藥物並沒有抑制cell cycle,而是促進apoptosis，那做單染PI跑flow的情況下，
是否圖形會沒差別，但實際上細胞生長狀況是下降的？
※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 18:37:46
抱歉我有點多問題QQ
※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 18:38:31
10F：推 ampicillin: apoptosis的話你有機會會看到sub-G1 = 肚破腸流的細胞11/16 18:51
可是若肚破腸流的太誇張，是不是酒精固定前就不會被離心下來了？
11F：→ ampicillin: flow的圖是靜態，但當你做time-dependent不就動態了嗎11/16 18:51
※ 編輯: boy12345761 (180.204.16.102), 11/16/2017 23:54:41
12F：→ blence: 你的疑問都不算是困擾,就像你藥物會探討"處理濃度",同樣的 11/17 00:08
13F：→ blence: 在flow實驗,怎麼就忽略了必須觀察不同時間變化的原則? 11/17 00:08
14F：→ blence: 做CCK8時讀值都放對照,擔憂flow實驗的那些也必然會有 11/17 00:15
15F：推 kuror: 上flow最一開始應該會圈選細胞大小及顆粒性正常的細胞進行 11/17 01:30
16F：→ kuror: 分析，所以pi染色的 sub-g1應該是細胞大小正常 但是染色體 11/17 01:30
17F：→ kuror: 斷裂要走向死亡的細胞，這部分細胞也可以被離心下來的。 11/17 01:30
可是如果late-apoptosis 細胞膜外翻，染色體通通丟出來了，這樣在pbs懸浮細胞後離心
時，會不會離心不下來，late-apoptosis就看不到了，可以用這個方式來看apoptosis而
決定藥物濃度嗎？
※ 編輯: boy12345761 (180.204.16.102), 11/18/2017 00:13:38
18F：→ kuror: 你說的情況細胞應該已經不完整，就算離下來，可能會被當成 11/18 02:20
19F：→ kuror: 雜訊排除，此外要看細胞凋亡 要用annexin 及pi雙染才可判定 11/18 02:20
20F：→ kuror: 。 11/18 02:20
21F：→ kuror: 要抓IC50，還是用MTT之類的抓大範圍作圖比較好判定 11/18 02:23