作者boy12345761 (boson)
看板Biotech
标题[讨论] cell cycle 累积是否等於细胞生长被抑
时间Wed Nov 15 14:30:07 2017
想请问板上各位大大
最近在做药物浓度的测试
因为实验室的cck8没了
老师要我直接去做单染PI
他说这样子可以看药物在某个浓度下
出现的细胞周期某一期累积
就可以顺便看细胞生长抑制
我不太懂细胞周期累积会等於生长抑制
而看了很多paper
都是先做cck再做cell cycle
想请问这两者可以从cell cycle去推cell proliferation吗？
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1F：→ Ed860227: 细胞周期有所谓的checkpoint ,当你的药物可以抑制cdk等11/15 19:50
2F：→ Ed860227: 相关蛋白 ,你的细胞就会大部分停留在某一期,这也代表你11/15 19:50
3F：→ Ed860227: 的细胞无法进行分裂11/15 19:50
4F：→ blence: 你应该要对CCK8与PI的机制或原理有一定程度的了解,11/15 21:26
5F：→ blence: 而不是只会用cell proliferation这麽笼统的称乎11/15 21:26
6F：→ blence: 至於最後一句,只要不上FLOW,答案都是否定的11/15 21:31
对这两个我都了解，但我不太懂的是，flow的图是静态的，怎麽可以确定大部分细胞停留
在某一期，就代表不会进行细胞分裂，甚至是细胞周期的速度，因为我并不知道下个时间
点的细胞周期状况
※ 编辑: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 11:16:38
7F：→ kuror: 与control相比，就会知道正常情况下细胞周期的分布，加药後11/16 12:20
8F：→ kuror: 如果细胞周期分布改变，就可推论是药物影响细胞周期的速度11/16 12:21
9F：→ kuror: 当细胞周期花费时间不同，生长也会受到影响11/16 12:21
但如果说药物并没有抑制cell cycle,而是促进apoptosis，那做单染PI跑flow的情况下，
是否图形会没差别，但实际上细胞生长状况是下降的？
※ 编辑: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 18:37:46
抱歉我有点多问题QQ
※ 编辑: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 18:38:31
10F：推 ampicillin: apoptosis的话你有机会会看到sub-G1 = 肚破肠流的细胞11/16 18:51
可是若肚破肠流的太夸张，是不是酒精固定前就不会被离心下来了？
11F：→ ampicillin: flow的图是静态，但当你做time-dependent不就动态了吗11/16 18:51
※ 编辑: boy12345761 (180.204.16.102), 11/16/2017 23:54:41
12F：→ blence: 你的疑问都不算是困扰,就像你药物会探讨"处理浓度",同样的 11/17 00:08
13F：→ blence: 在flow实验,怎麽就忽略了必须观察不同时间变化的原则? 11/17 00:08
14F：→ blence: 做CCK8时读值都放对照,担忧flow实验的那些也必然会有 11/17 00:15
15F：推 kuror: 上flow最一开始应该会圈选细胞大小及颗粒性正常的细胞进行 11/17 01:30
16F：→ kuror: 分析，所以pi染色的 sub-g1应该是细胞大小正常 但是染色体 11/17 01:30
17F：→ kuror: 断裂要走向死亡的细胞，这部分细胞也可以被离心下来的。 11/17 01:30
可是如果late-apoptosis 细胞膜外翻，染色体通通丢出来了，这样在pbs悬浮细胞後离心
时，会不会离心不下来，late-apoptosis就看不到了，可以用这个方式来看apoptosis而
决定药物浓度吗？
※ 编辑: boy12345761 (180.204.16.102), 11/18/2017 00:13:38
18F：→ kuror: 你说的情况细胞应该已经不完整，就算离下来，可能会被当成 11/18 02:20
19F：→ kuror: 杂讯排除，此外要看细胞凋亡 要用annexin 及pi双染才可判定 11/18 02:20
20F：→ kuror: 。 11/18 02:20
21F：→ kuror: 要抓IC50，还是用MTT之类的抓大范围作图比较好判定 11/18 02:23