作者blueberrytv (blueberrytv)
看板Biotech
標題[求救] DNA電泳 GAPDH band歪
時間Fri Nov 10 11:32:25 2017
各位先進好
小弟日前在做DNA 電泳時
發現GAPDH的band歪歪的形狀也很奇怪
https://i.imgur.com/zq5ibi1.jpg
因為當天是跑同濃度的兩片膠
都是2% 100V 跑25分鐘左右
配膠和電泳槽都是用的是新的TBE
第一片跑的目標基因band是正常的
於是懷疑是前一片膠剛跑完buffer溫度太高
隔天同一批sample單獨再跑一次GAPDH
這次改為50V 跑的時間拉長
跑出來的band還是歪歪的形狀也不太正常
https://i.imgur.com/g1X2zPZ.jpg
想問各位大大有遇過類似情形
或是有什麼條件我可以再改正嗎
感謝！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.71.94.31
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1510284747.A.0DE.html
1F：→ xxtomnyxx: 看起來是 gel 的 buffer 和電泳槽的 buffer 的不一樣，11/10 11:48
2F：→ xxtomnyxx: 還有每個 sample 的 buffer 似乎也不同造成的11/10 11:49
3F：→ xxtomnyxx: Gel 的部分可能是配製時蒸發的水沒補或補太多，或者是11/10 11:50
4F：→ xxtomnyxx: 或者是電泳槽的 buffer 放太久蒸發太多水。11/10 11:50
謝謝大大～但都是用同一罐buffer唷！
5F：→ blence: 推測,你PCR取target跟GAPDH相同cycle放大、相同體積跑膠11/10 12:27
6F：→ blence: 當你覺得target正常,這時GAPDH的產物太多,膠圖肯定不好看11/10 12:28
7F：→ blence: marker其實沒歪,再加上marker這麼弱,所以懷疑是上面因素11/10 12:29
好的，很認同大大的看法，會嘗試從這邊下手
8F：推 july81212: tracking 都歪掉了 應該換buffer 電泳槽順便洗一下吧11/10 14:28
9F：推 july81212: 然後有tailing 可以load少點會好些11/10 14:30
是很久沒洗了哈哈來洗一下，減少loading 的量ok!
10F：推 aeroufo: 膠的厚薄不一嗎？11/10 16:12
厚薄我覺得是一樣 都用用50ml做的
不知道是不是太厚
※ 編輯: blueberrytv (203.71.94.31), 11/10/2017 17:34:44
11F：→ Ianthegood: 你用TBS跑agarose??11/10 18:23
12F：→ aj1139: 問題同樓上，正常不是TAE或TBE嗎？11/10 21:42
講錯了 是TBE 已修！
13F：→ ernielwl: buffer換TAE吧，然後laoding的量減半，整條跑道都爆了11/11 17:15
14F：→ ernielwl: 然後制膠時候一定要確定煮滾並且均勻11/11 17:17
好！感謝大大建議～
※ 編輯: blueberrytv (203.71.94.31), 11/13/2017 09:27:43