作者blueberrytv (blueberrytv)
看板Biotech
标题[求救] DNA电泳 GAPDH band歪
时间Fri Nov 10 11:32:25 2017
各位先进好
小弟日前在做DNA 电泳时
发现GAPDH的band歪歪的形状也很奇怪
https://i.imgur.com/zq5ibi1.jpg
因为当天是跑同浓度的两片胶
都是2% 100V 跑25分钟左右
配胶和电泳槽都是用的是新的TBE
第一片跑的目标基因band是正常的
於是怀疑是前一片胶刚跑完buffer温度太高
隔天同一批sample单独再跑一次GAPDH
这次改为50V 跑的时间拉长
跑出来的band还是歪歪的形状也不太正常
https://i.imgur.com/g1X2zPZ.jpg
想问各位大大有遇过类似情形
或是有什麽条件我可以再改正吗
感谢！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 203.71.94.31
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1510284747.A.0DE.html
1F：→ xxtomnyxx: 看起来是 gel 的 buffer 和电泳槽的 buffer 的不一样，11/10 11:48
2F：→ xxtomnyxx: 还有每个 sample 的 buffer 似乎也不同造成的11/10 11:49
3F：→ xxtomnyxx: Gel 的部分可能是配制时蒸发的水没补或补太多，或者是11/10 11:50
4F：→ xxtomnyxx: 或者是电泳槽的 buffer 放太久蒸发太多水。11/10 11:50
谢谢大大～但都是用同一罐buffer唷！
5F：→ blence: 推测,你PCR取target跟GAPDH相同cycle放大、相同体积跑胶11/10 12:27
6F：→ blence: 当你觉得target正常,这时GAPDH的产物太多,胶图肯定不好看11/10 12:28
7F：→ blence: marker其实没歪,再加上marker这麽弱,所以怀疑是上面因素11/10 12:29
好的，很认同大大的看法，会尝试从这边下手
8F：推 july81212: tracking 都歪掉了 应该换buffer 电泳槽顺便洗一下吧11/10 14:28
9F：推 july81212: 然後有tailing 可以load少点会好些11/10 14:30
是很久没洗了哈哈来洗一下，减少loading 的量ok!
10F：推 aeroufo: 胶的厚薄不一吗？11/10 16:12
厚薄我觉得是一样 都用用50ml做的
不知道是不是太厚
※ 编辑: blueberrytv (203.71.94.31), 11/10/2017 17:34:44
11F：→ Ianthegood: 你用TBS跑agarose??11/10 18:23
12F：→ aj1139: 问题同楼上，正常不是TAE或TBE吗？11/10 21:42
讲错了 是TBE 已修！
13F：→ ernielwl: buffer换TAE吧，然後laoding的量减半，整条跑道都爆了11/11 17:15
14F：→ ernielwl: 然後制胶时候一定要确定煮滚并且均匀11/11 17:17
好！感谢大大建议～
※ 编辑: blueberrytv (203.71.94.31), 11/13/2017 09:27:43