作者boy12345761 (boson)
看板Biotech
標題[求救] transfection前步驟
時間Fri Nov 3 18:31:36 2017
最近在做transfection
養的細胞是A549
先把120000顆細胞種入24well細胞盤
並用有抗生素的培養基培養
在24小時後換成沒有抗生素的medium
並放回去incubator 30分鐘
這時候去配transfection reagent
再換medium前看細胞是滿盤
但incubate 30分鐘後看細胞都浮起來了
想問幾個問題
1.為什麼細胞會浮起來？
2.前面120000顆細胞會太多嗎？
3.培養基要換成沒有抗生素的嗎？
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1F：→ lail: 你用那一種方法transfevtion?11/03 21:26
2F：推 cyc5566: 呃...你的狀況似乎跟transfection無關。只是細胞種滿之後11/03 22:53
3F：→ cyc5566: 換成無抗生素medium就飄起來了？11/03 22:53
4F：→ cyc5566: 我猜1.你的細胞不健康，A549很能貼的 2.你的24well有問題11/03 22:54
5F：→ cyc5566: 3.可能換medium的時候直接往細胞大力噴，神仙難救11/03 22:55
6F：→ cyc5566: 檢查方法是：換完medium馬上看細胞有無飄起來，才知道是11/03 22:55
7F：→ cyc5566: 技術或耗材問題11/03 22:56
可是我沒有朝細胞噴，頂多後面無力稍微滴幾滴下去…24well有問題是什麼意思？
※ 編輯: boy12345761 (49.214.198.116), 11/03/2017 23:20:51
8F：推 joseph103331: 你在換完的當下有沒有看是否被沖起來?11/04 00:30
9F：→ joseph103331: 有不少細胞株血清都不是活著的必須條件11/04 00:30
呃 請問這句話是什麼意思？
10F：推 qiet: 1.你的無抗生素medium有問題? A549並不容易被沖起來11/04 01:16
我也不確定…但這兩天有其他人做過有成功
11F：推 qiet: 2. 這你可以自己觀察seeding多少隔天會到7-8成滿11/04 01:20
12F：→ qiet: 以A549來說應該是有點多11/04 01:20
所以不該是剛好滿盤的時候轉染嗎？
13F：→ qiet: 3.通常reagent protocol都說建議不要加11/04 01:22
那加了還是可以做囉？
14F：→ cyc5566: 24well表面會經過類似靜電處理，讓細胞容易貼附。這也是11/04 15:43
15F：→ cyc5566: 一般Agar plate與Cell culture plate的不同11/04 15:43
16F：推 melaleuca: 想請問DNA的總量？11/04 20:38
17F：→ roy047: 還沒加DNA就飄起來了 不是transfection reagents的問題11/07 02:07
18F：推 tynse71864: 感覺是沒抗生素的那罐怪怪的啊11/07 16:29
可是大家都用那罐欸，同時期有三個人在做transfection
19F：→ tynse71864: 重配或換罐?11/07 16:29
感謝大家，目前老師推測是細胞太滿不健康，要我再做一次，這次如果一樣狀況，再上來
求救QQ
※ 編輯: boy12345761 (49.217.213.79), 11/08/2017 21:10:09
20F：→ blence: 只給"細胞太滿不健康,要我再做一次"建議的話,內容太薄弱了 11/08 21:40
21F：→ blence: 萬一遇到相同狀況,應該是請老師出來面對才是11/08 21:41
22F：→ blence: 至少要釐清,是12萬顆太多?還是種的數量超過12萬顆太多? 11/08 21:41
23F：→ blence: 而不是單純重做,才能在以後知道該怎麼調整 11/08 21:43
24F：→ blence: 另外,無抗生素的medium是?跟原本的medium只是抗生素差異?11/08 21:45
嗯嗯 只有差在沒有抗生素
25F：→ blence: 以及你這裡是描述"大家共用",這等同大家都同樣做A549嗎？ 11/08 21:47
是的，都在做A549
26F：→ blence: 單純從回應假設你跟大家所有的都一樣,的確可歸咎細胞太多11/08 21:52
27F：→ blence: 可是從回應描述的方式,卻又不是那麼的肯定 11/08 21:55
28F：推 cyc5566: 對了，我24well種五萬顆，給你參考 11/09 00:04
29F：推 joseph103331: 我看錯了，把換成無抗生素看成無血清......本以為11/09 00:19
30F：→ joseph103331: 你懷疑是無血清導致細胞懸浮 11/09 00:19
31F：推 tynse71864: 昨天看了一下 12w顆好像是12well transfect種的數量？11/10 23:58
32F：→ tynse71864: 搞不好真的太滿一沖就掉 11/10 23:58
這次做的結果沒有浮起來的現象，而東西都是一樣的管子與細胞都12萬顆，老師跟我推測
可能我在卡細胞到24well時就已經太滿，所以細胞本身太小顆不健康，所以到24well細胞
也不健康，才容易浮起來，這樣的推測我有點覺得奇怪，可是我還是相信了0.0
※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/15/2017 14:20:13