作者boy12345761 (boson)
看板Biotech
标题[求救] transfection前步骤
时间Fri Nov 3 18:31:36 2017
最近在做transfection
养的细胞是A549
先把120000颗细胞种入24well细胞盘
并用有抗生素的培养基培养
在24小时後换成没有抗生素的medium
并放回去incubator 30分钟
这时候去配transfection reagent
再换medium前看细胞是满盘
但incubate 30分钟後看细胞都浮起来了
想问几个问题
1.为什麽细胞会浮起来？
2.前面120000颗细胞会太多吗？
3.培养基要换成没有抗生素的吗？
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1F：→ lail: 你用那一种方法transfevtion?11/03 21:26
2F：推 cyc5566: 呃...你的状况似乎跟transfection无关。只是细胞种满之後11/03 22:53
3F：→ cyc5566: 换成无抗生素medium就飘起来了？11/03 22:53
4F：→ cyc5566: 我猜1.你的细胞不健康，A549很能贴的 2.你的24well有问题11/03 22:54
5F：→ cyc5566: 3.可能换medium的时候直接往细胞大力喷，神仙难救11/03 22:55
6F：→ cyc5566: 检查方法是：换完medium马上看细胞有无飘起来，才知道是11/03 22:55
7F：→ cyc5566: 技术或耗材问题11/03 22:56
可是我没有朝细胞喷，顶多後面无力稍微滴几滴下去…24well有问题是什麽意思？
※ 编辑: boy12345761 (49.214.198.116), 11/03/2017 23:20:51
8F：推 joseph103331: 你在换完的当下有没有看是否被冲起来?11/04 00:30
9F：→ joseph103331: 有不少细胞株血清都不是活着的必须条件11/04 00:30
呃 请问这句话是什麽意思？
10F：推 qiet: 1.你的无抗生素medium有问题? A549并不容易被冲起来11/04 01:16
我也不确定…但这两天有其他人做过有成功
11F：推 qiet: 2. 这你可以自己观察seeding多少隔天会到7-8成满11/04 01:20
12F：→ qiet: 以A549来说应该是有点多11/04 01:20
所以不该是刚好满盘的时候转染吗？
13F：→ qiet: 3.通常reagent protocol都说建议不要加11/04 01:22
那加了还是可以做罗？
14F：→ cyc5566: 24well表面会经过类似静电处理，让细胞容易贴附。这也是11/04 15:43
15F：→ cyc5566: 一般Agar plate与Cell culture plate的不同11/04 15:43
16F：推 melaleuca: 想请问DNA的总量？11/04 20:38
17F：→ roy047: 还没加DNA就飘起来了 不是transfection reagents的问题11/07 02:07
18F：推 tynse71864: 感觉是没抗生素的那罐怪怪的啊11/07 16:29
可是大家都用那罐欸，同时期有三个人在做transfection
19F：→ tynse71864: 重配或换罐?11/07 16:29
感谢大家，目前老师推测是细胞太满不健康，要我再做一次，这次如果一样状况，再上来
求救QQ
※ 编辑: boy12345761 (49.217.213.79), 11/08/2017 21:10:09
20F：→ blence: 只给"细胞太满不健康,要我再做一次"建议的话,内容太薄弱了 11/08 21:40
21F：→ blence: 万一遇到相同状况,应该是请老师出来面对才是11/08 21:41
22F：→ blence: 至少要厘清,是12万颗太多?还是种的数量超过12万颗太多? 11/08 21:41
23F：→ blence: 而不是单纯重做,才能在以後知道该怎麽调整 11/08 21:43
24F：→ blence: 另外,无抗生素的medium是?跟原本的medium只是抗生素差异?11/08 21:45
嗯嗯 只有差在没有抗生素
25F：→ blence: 以及你这里是描述"大家共用",这等同大家都同样做A549吗？ 11/08 21:47
是的，都在做A549
26F：→ blence: 单纯从回应假设你跟大家所有的都一样,的确可归咎细胞太多11/08 21:52
27F：→ blence: 可是从回应描述的方式,却又不是那麽的肯定 11/08 21:55
28F：推 cyc5566: 对了，我24well种五万颗，给你参考 11/09 00:04
29F：推 joseph103331: 我看错了，把换成无抗生素看成无血清......本以为11/09 00:19
30F：→ joseph103331: 你怀疑是无血清导致细胞悬浮 11/09 00:19
31F：推 tynse71864: 昨天看了一下 12w颗好像是12well transfect种的数量？11/10 23:58
32F：→ tynse71864: 搞不好真的太满一冲就掉 11/10 23:58
这次做的结果没有浮起来的现象，而东西都是一样的管子与细胞都12万颗，老师跟我推测
可能我在卡细胞到24well时就已经太满，所以细胞本身太小颗不健康，所以到24well细胞
也不健康，才容易浮起来，这样的推测我有点觉得奇怪，可是我还是相信了0.0
※ 编辑: boy12345761 (101.9.162.119), 11/15/2017 14:20:13