作者Illusings (旗魚)
看板Biotech
標題[求救] total RNA DNase treatment
時間Fri Oct 27 13:16:25 2017
板上各位先進大家好
小弟目前用DNase處理total RNA大致流程如下
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RNA使用trizol/phenol/chloroform萃取後
取上層液體後，沉澱→離心→乾燥→回溶
然後再加入DNase 37度C 20min
再度使用phenol/chloroform萃取(去除DNase)
取上層液體→沉澱→離心→乾燥→回溶
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過程繁複費時
如果我在第一次上層液體中
直接加入DNase 37度C 20min
再使用phenol/chloroform萃取
取上層液體→沉澱→離心→乾燥→回溶
(節省一次沉澱、離心、乾燥的過程)
請問這樣處理是否可行？
或是板上先進們有更好的方法呢？
感謝各位！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.121.200.159
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1509081388.A.317.html
1F：推 duriamon: 看你要做什麼用途吧…如果是要做RT，通常用加熱就可以把 10/27 13:51
2F：→ duriamon: DNase給幹掉了。 10/27 13:51
3F：推 joseph103331: 應該不是不行,不過要注意反應的條件,RNA用的Trizol 10/27 14:11
4F：→ joseph103331: 比較酸,DNase要pH7左右,所以....如果有辦法調的話 10/27 14:12
5F：推 joseph103331: 我覺得可以查查看那些one-step的kit怎麼弄的 10/27 14:15
我要轉cDNA然後上qPCR
我會先測試一批樣本看看
再來就是去查one-step kit的資料
感謝你們！
※ 編輯: Illusings (140.121.200.159), 10/27/2017 15:59:37
6F：→ storm780121: 試用過抽完RNA 直接加DNase反應 然後終止 接著直接加 10/27 19:45
7F：→ storm780121: RTase轉cDNA的kit 印象上realtime的效果ok 缺點是一 10/27 19:45
8F：→ storm780121: 次只能翻500ng 使用上方便不少 但是價格沒印象了 XD 10/27 19:45
9F：推 duriamon: DNase處理完再使用phenol/chloroform萃取跟本是冗步，建 10/27 20:46
10F：→ duriamon: 議你把DNase I的使用說明看一下 10/27 20:46
11F：推 huuban: 用TURBO的話是可以省不少步，但是通常還是會接酒精沉澱 10/27 21:06
12F：→ huuban: 如果照他的protocol是5分鐘終止反應，1.5分鐘離心，結束 10/27 21:07
謝謝以上各位的建議
turbo看起來很方便，趕緊來去訂一套XDDD
※ 編輯: Illusings (1.169.70.199), 10/28/2017 21:55:36