作者Illusings (旗鱼)
看板Biotech
标题[求救] total RNA DNase treatment
时间Fri Oct 27 13:16:25 2017
板上各位先进大家好
小弟目前用DNase处理total RNA大致流程如下
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RNA使用trizol/phenol/chloroform萃取後
取上层液体後，沉淀→离心→乾燥→回溶
然後再加入DNase 37度C 20min
再度使用phenol/chloroform萃取(去除DNase)
取上层液体→沉淀→离心→乾燥→回溶
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过程繁复费时
如果我在第一次上层液体中
直接加入DNase 37度C 20min
再使用phenol/chloroform萃取
取上层液体→沉淀→离心→乾燥→回溶
(节省一次沉淀、离心、乾燥的过程)
请问这样处理是否可行？
或是板上先进们有更好的方法呢？
感谢各位！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.121.200.159
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1509081388.A.317.html
1F：推 duriamon: 看你要做什麽用途吧…如果是要做RT，通常用加热就可以把 10/27 13:51
2F：→ duriamon: DNase给干掉了。 10/27 13:51
3F：推 joseph103331: 应该不是不行,不过要注意反应的条件,RNA用的Trizol 10/27 14:11
4F：→ joseph103331: 比较酸,DNase要pH7左右,所以....如果有办法调的话 10/27 14:12
5F：推 joseph103331: 我觉得可以查查看那些one-step的kit怎麽弄的 10/27 14:15
我要转cDNA然後上qPCR
我会先测试一批样本看看
再来就是去查one-step kit的资料
感谢你们！
※ 编辑: Illusings (140.121.200.159), 10/27/2017 15:59:37
6F：→ storm780121: 试用过抽完RNA 直接加DNase反应 然後终止 接着直接加 10/27 19:45
7F：→ storm780121: RTase转cDNA的kit 印象上realtime的效果ok 缺点是一 10/27 19:45
8F：→ storm780121: 次只能翻500ng 使用上方便不少 但是价格没印象了 XD 10/27 19:45
9F：推 duriamon: DNase处理完再使用phenol/chloroform萃取跟本是冗步，建 10/27 20:46
10F：→ duriamon: 议你把DNase I的使用说明看一下 10/27 20:46
11F：推 huuban: 用TURBO的话是可以省不少步，但是通常还是会接酒精沉淀 10/27 21:06
12F：→ huuban: 如果照他的protocol是5分钟终止反应，1.5分钟离心，结束 10/27 21:07
谢谢以上各位的建议
turbo看起来很方便，赶紧来去订一套XDDD
※ 编辑: Illusings (1.169.70.199), 10/28/2017 21:55:36