作者GanLinBa (Fait votre père)
看板Biotech
標題[方法] drug-resistant cell line
時間Wed Aug 9 23:38:31 2017
我們實驗室有篩選出來的gemcitabine-resistant cell line
我想問 在maintain cell line 時我們會加drug
1.
但如果要單純比較parental vs gemcitabine-resistant cell line在不同環境
例如starvation vs hypoxia vs FBS的某個protein表現
做實驗有需要加gemcitabine嗎?
老闆說因為這個是篩選出來的
所以就像stable cell line 做實驗不需要加gemcitabine
2.在gemcitabine-resistant cell line 想看某個gene是不是對於resistance很重要
所以我就利用gemcitabine-resistant cell line去用virus knock down實驗後
加puromycin去篩選 請問這時需要也加gemcitabine一起去篩選嗎?
如果puromycin+gemcitabine 可是這樣篩會不會導致引起其他gene誘發resistance?
感謝
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1F：推 joseph103331: 1.我覺得要加,不過安心起見要加不加可以一起比較 08/10 14:10
2F：→ joseph103331: 你不知道加了會不會有影響,可是突然不加也是一樣 08/10 14:10
3F：→ joseph103331: 多一組平行比較一下看看 08/10 14:11
4F：→ joseph103331: 2. 都要加,就是抗雙藥物而已,篩藥本就有可能篩到抗 08/10 14:12
5F：→ joseph103331: 藥的細胞,用single cell比較沒這個問題,不過也會被 08/10 14:14
6F：→ joseph103331: 質疑嵌入的序列,所以要多挑幾顆 08/10 14:14
7F：→ GanLinBa: 感謝 08/10 15:43
8F：推 jabari: 反正是cell line..這次不作, 以後reviewer也會問 08/10 15:50
9F：→ blence: 用puro篩出活下來的細胞,會是puro sensitive嗎？ 08/10 17:04
10F：→ blence: 同樣的,KD的時候加gem,可以篩出gem-resistant gene KD？ 08/10 17:05
11F：→ Ianthegood: 你一開始這個cell line是transient還是stable clone? 08/10 19:46
12F：→ GanLinBa: resistant cell line 是篩出來的 08/10 23:37
13F：→ schmitt: "stable cell line 做實驗不需要加gemcitabine"??是嗎??? 08/13 12:26
14F：→ schmitt: 為什麼我學到的要加 08/13 12:27
15F：→ GanLinBa: maintain會 但如果要做gemcitabine的影響會加 08/14 20:08
16F：→ GanLinBa: 但如果我想看microenviroment對resistant cell line 08/14 20:08
17F：→ GanLinBa: 就不會 08/14 20:08