作者GanLinBa (Fait votre père)
看板Biotech
标题[方法] drug-resistant cell line
时间Wed Aug 9 23:38:31 2017
我们实验室有筛选出来的gemcitabine-resistant cell line
我想问 在maintain cell line 时我们会加drug
1.
但如果要单纯比较parental vs gemcitabine-resistant cell line在不同环境
例如starvation vs hypoxia vs FBS的某个protein表现
做实验有需要加gemcitabine吗?
老板说因为这个是筛选出来的
所以就像stable cell line 做实验不需要加gemcitabine
2.在gemcitabine-resistant cell line 想看某个gene是不是对於resistance很重要
所以我就利用gemcitabine-resistant cell line去用virus knock down实验後
加puromycin去筛选 请问这时需要也加gemcitabine一起去筛选吗?
如果puromycin+gemcitabine 可是这样筛会不会导致引起其他gene诱发resistance?
感谢
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1F：推 joseph103331: 1.我觉得要加,不过安心起见要加不加可以一起比较 08/10 14:10
2F：→ joseph103331: 你不知道加了会不会有影响,可是突然不加也是一样 08/10 14:10
3F：→ joseph103331: 多一组平行比较一下看看 08/10 14:11
4F：→ joseph103331: 2. 都要加,就是抗双药物而已,筛药本就有可能筛到抗 08/10 14:12
5F：→ joseph103331: 药的细胞,用single cell比较没这个问题,不过也会被 08/10 14:14
6F：→ joseph103331: 质疑嵌入的序列,所以要多挑几颗 08/10 14:14
7F：→ GanLinBa: 感谢 08/10 15:43
8F：推 jabari: 反正是cell line..这次不作, 以後reviewer也会问 08/10 15:50
9F：→ blence: 用puro筛出活下来的细胞,会是puro sensitive吗？ 08/10 17:04
10F：→ blence: 同样的,KD的时候加gem,可以筛出gem-resistant gene KD？ 08/10 17:05
11F：→ Ianthegood: 你一开始这个cell line是transient还是stable clone? 08/10 19:46
12F：→ GanLinBa: resistant cell line 是筛出来的 08/10 23:37
13F：→ schmitt: "stable cell line 做实验不需要加gemcitabine"??是吗??? 08/13 12:26
14F：→ schmitt: 为什麽我学到的要加 08/13 12:27
15F：→ GanLinBa: maintain会 但如果要做gemcitabine的影响会加 08/14 20:08
16F：→ GanLinBa: 但如果我想看microenviroment对resistant cell line 08/14 20:08
17F：→ GanLinBa: 就不会 08/14 20:08