作者tanya1993 (幫幫)
看板Biotech
標題[求救] bacillus subtilis菌量爆增
時間Fri Apr 28 23:48:53 2017
想請問一下版上
就是我用bacillus subtilis來表現蛋白
一直以來我都是從凍管劃平板
然後在從平板上刮菌直接液態培養
然後再取胞外液跑SDS PAGE看表現量
之前培養完後的OD值大約只有2~3左右
可是最近不管怎麼養OD都很飆到5~6或是更高
然而我發現OD值越高我的表現量不是很少不然就是幾乎看不到
想問是不是bacillus subtilis在凍管放久是不是容易變異，還是因為我常常凍管拿進拿
出導致我的bacillus subtilis變不穩定
附上試過的培養條件
30度 150rpm 12hr 24hr 各測一次OD 都已經到5
37度 200rpm 12hr 24hr 如上
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1F：→ Bows: 有汙染吧 04/28 23:50
2F：推 Ianthegood: 我也覺得是污染XD 04/29 00:07
3F：→ tanya1993: 其實我也有想過汙染的可能，只是我都有放抗生素。 04/29 01:34
4F：→ tanya1993: 可是我覺得學長教配抗生素的方法有點奇怪。 04/29 01:34
5F：→ tanya1993: 我是取0.001g的Erythromycin+1mL ddH2O，但是我發現Ery 04/29 01:34
6F：→ tanya1993: thromycin不太溶於水，所以學長就叫我把多餘的抗生素 04/29 01:34
7F：→ tanya1993: 用小飛碟過濾即可，這樣濃度不就跑掉了!!??想問一下 04/29 01:34
8F：→ tanya1993: 還是我有什麼辦法可以溶Erythromycin??? 04/29 01:34
9F：推 Ianthegood: stock要配在酒精裡 04/29 05:35
10F：→ Ianthegood: 學長要打屁股XD 04/29 05:35
11F：→ tanya1993: 想問一下 要如何用酒精配製??是要用幾%的??我看網路上 04/29 09:14
12F：→ tanya1993: 有人說用適當純酒精溶後，再用水定量??這樣對嗎？謝謝 04/29 09:14
13F：→ tanya1993: 大大 04/29 09:14
14F：推 tynse71864: 用酒精配到飽和濃度就行了吧 04/29 14:34
15F：→ Ianthegood: google sigma erythromycin 04/29 20:37
16F：推 andy6001: 污染吧… 04/30 18:11
17F：→ qumai: 污染了... 05/02 12:05
18F：推 a10s07: 怎麼看都像是汙染 05/03 15:40
19F：推 joseph103331: 可以鏡檢一下,通常都是球菌或大腸桿菌汙染較多 05/31 16:21
20F：→ joseph103331: 跟桿菌會有明顯差異 05/31 16:21
21F：→ satasumi: 污染90%,Ery使用濃度很低,再找一個抗生素一起再篩選 04/23 13:21