作者tanya1993 (帮帮)
看板Biotech
标题[求救] bacillus subtilis菌量爆增
时间Fri Apr 28 23:48:53 2017
想请问一下版上
就是我用bacillus subtilis来表现蛋白
一直以来我都是从冻管划平板
然後在从平板上刮菌直接液态培养
然後再取胞外液跑SDS PAGE看表现量
之前培养完後的OD值大约只有2~3左右
可是最近不管怎麽养OD都很飙到5~6或是更高
然而我发现OD值越高我的表现量不是很少不然就是几乎看不到
想问是不是bacillus subtilis在冻管放久是不是容易变异，还是因为我常常冻管拿进拿
出导致我的bacillus subtilis变不稳定
附上试过的培养条件
30度 150rpm 12hr 24hr 各测一次OD 都已经到5
37度 200rpm 12hr 24hr 如上
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 111.83.20.2
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1493394536.A.C33.html
1F：→ Bows: 有污染吧 04/28 23:50
2F：推 Ianthegood: 我也觉得是污染XD 04/29 00:07
3F：→ tanya1993: 其实我也有想过污染的可能，只是我都有放抗生素。 04/29 01:34
4F：→ tanya1993: 可是我觉得学长教配抗生素的方法有点奇怪。 04/29 01:34
5F：→ tanya1993: 我是取0.001g的Erythromycin+1mL ddH2O，但是我发现Ery 04/29 01:34
6F：→ tanya1993: thromycin不太溶於水，所以学长就叫我把多余的抗生素 04/29 01:34
7F：→ tanya1993: 用小飞碟过滤即可，这样浓度不就跑掉了!!??想问一下 04/29 01:34
8F：→ tanya1993: 还是我有什麽办法可以溶Erythromycin??? 04/29 01:34
9F：推 Ianthegood: stock要配在酒精里 04/29 05:35
10F：→ Ianthegood: 学长要打屁股XD 04/29 05:35
11F：→ tanya1993: 想问一下 要如何用酒精配制??是要用几%的??我看网路上 04/29 09:14
12F：→ tanya1993: 有人说用适当纯酒精溶後，再用水定量??这样对吗？谢谢 04/29 09:14
13F：→ tanya1993: 大大 04/29 09:14
14F：推 tynse71864: 用酒精配到饱和浓度就行了吧 04/29 14:34
15F：→ Ianthegood: google sigma erythromycin 04/29 20:37
16F：推 andy6001: 污染吧… 04/30 18:11
17F：→ qumai: 污染了... 05/02 12:05
18F：推 a10s07: 怎麽看都像是污染 05/03 15:40
19F：推 joseph103331: 可以镜检一下,通常都是球菌或大肠杆菌污染较多 05/31 16:21
20F：→ joseph103331: 跟杆菌会有明显差异 05/31 16:21
21F：→ satasumi: 污染90%,Ery使用浓度很低,再找一个抗生素一起再筛选 04/23 13:21