作者allthebest (allthebest)
看板Biotech
標題[求救] tranfection LF2000 OPTI-MEM問題
時間Wed Apr 26 17:29:17 2017
LF2000新手
第一次用lipofectamin2000做transfect(以前用lentiviro system)
大概步驟看protocol都懂
我要轉染siRNA 也買了OPTI-MEM
我卡在siRNA+Opti-MEM以及LF2000+Opti-MEM mixture要加入細胞的地方有問題
q1:除了mixture之外 我的細胞培養液也是全部換成reduse serum Opti-MEM嗎?
還是原本細胞適用的McCoy5A培養液原液（不加fbs,ps)
q2: trasfect 4-6h 要換compelet medium
(就是看到這個步驟我才會想上一步驟transfect時是不是用McCoy5A原液）
所以我只有trasfect 6小時 然後其他42小時只是在等細胞複製這樣嗎？
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.92.164
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1493198960.A.B55.html
1F：→ allthebest: 已找到高手解決:) 04/26 17:54
2F：→ allthebest: 高手說q1用原液，q2可以拉長到12-16小時再換complete 04/26 17:58
3F：→ allthebest: medium 有高手有其他建議也很歡迎喔 謝謝 04/26 17:58
4F：→ e104582001: 其實都要再試試，不同細胞會有不同的效果 04/26 19:21
5F：→ e104582001: 有些用Opt-MEM效果會比用 growth medium 效果好 04/26 19:22
6F：→ e104582001: (C2C12就是這樣)沒有什麼步驟一定好，像我做是 04/26 19:22
7F：→ e104582001: 18~24hr才換medium 04/26 19:22
8F：→ e104582001: 所以最佳條件還是要看不同細胞株去 try 才會知道 04/26 19:23
9F：→ xxtomnyxx: transfect 後要換 medium 主要是因為 lipo 有毒性，如 04/26 23:37
10F：→ xxtomnyxx: 果你的細胞很耐都不會死，反而都不用換 transfect 的 04/26 23:37
11F：→ xxtomnyxx: 效率還會高的多 04/26 23:37
12F：→ xxtomnyxx: 所以就如 e 大說的，不同細胞株的狀況都不太一樣 04/26 23:38
13F：→ allthebest: 了解 原來是因為lipo有毒性啊 感謝我會參考的 04/27 00:03