作者allthebest (allthebest)
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标题[求救] tranfection LF2000 OPTI-MEM问题
时间Wed Apr 26 17:29:17 2017
LF2000新手
第一次用lipofectamin2000做transfect(以前用lentiviro system)
大概步骤看protocol都懂
我要转染siRNA 也买了OPTI-MEM
我卡在siRNA+Opti-MEM以及LF2000+Opti-MEM mixture要加入细胞的地方有问题
q1:除了mixture之外 我的细胞培养液也是全部换成reduse serum Opti-MEM吗?
还是原本细胞适用的McCoy5A培养液原液（不加fbs,ps)
q2: trasfect 4-6h 要换compelet medium
(就是看到这个步骤我才会想上一步骤transfect时是不是用McCoy5A原液）
所以我只有trasfect 6小时 然後其他42小时只是在等细胞复制这样吗？
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1F：→ allthebest: 已找到高手解决:) 04/26 17:54
2F：→ allthebest: 高手说q1用原液，q2可以拉长到12-16小时再换complete 04/26 17:58
3F：→ allthebest: medium 有高手有其他建议也很欢迎喔 谢谢 04/26 17:58
4F：→ e104582001: 其实都要再试试，不同细胞会有不同的效果 04/26 19:21
5F：→ e104582001: 有些用Opt-MEM效果会比用 growth medium 效果好 04/26 19:22
6F：→ e104582001: (C2C12就是这样)没有什麽步骤一定好，像我做是 04/26 19:22
7F：→ e104582001: 18~24hr才换medium 04/26 19:22
8F：→ e104582001: 所以最佳条件还是要看不同细胞株去 try 才会知道 04/26 19:23
9F：→ xxtomnyxx: transfect 後要换 medium 主要是因为 lipo 有毒性，如 04/26 23:37
10F：→ xxtomnyxx: 果你的细胞很耐都不会死，反而都不用换 transfect 的 04/26 23:37
11F：→ xxtomnyxx: 效率还会高的多 04/26 23:37
12F：→ xxtomnyxx: 所以就如 e 大说的，不同细胞株的状况都不太一样 04/26 23:38
13F：→ allthebest: 了解 原来是因为lipo有毒性啊 感谢我会参考的 04/27 00:03