作者hachibuya (黃金騎士 牙狼)
看板Biotech
標題[求救] 有人做過lysosome fraction isolation嗎
時間Mon Mar 20 22:46:07 2017
我使用ThermoFisher的kit
Lysosome isolation kit from tissue and cultured cells
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/89839
試著分離MDA-MB-231乳癌細胞的lysosome
結果分離出來的東西做WB和total cell lysate有八七成像
表示分離完全失敗
我遇到的一個問題是說明書上的範例使用A431 cell
lysate完是乳白色液體 超離心後會有很明顯的分層
http://i.imgur.com/NwQwo8H.jpg
但是我的cell lysate是透明的 離完心全部都是透明的
我只好假裝有分層取最上層2ml的液體來分析
結果是失敗的
不知道有沒有人有經驗能幫幫我的
感激不盡
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1F：→ Ianthegood: 沒用過隨便問XD 你的gradient怎麼疊的? 03/20 22:55
2F：→ hachibuya: 就照說明書上的30% 27% 23% 20% 17%這樣疊, 但上面也 03/20 22:57
3F：→ hachibuya: 註明濃度可能會依細胞不同有所不同 我會再查看看 03/20 22:59
4F：→ hachibuya: cell lysate是15%疊在最上面 03/20 23:00
5F：推 tynse71864: 1.細胞怎麼破的 2.lysate乳白色應該是胞內lipidor高 03/21 00:48
6F：→ tynse71864: 濃度蛋白 細胞下多少呢? 03/21 00:48
7F：→ tynse71864: 如果不確定分離效果 ，你可以把 gradient分 fraction 03/21 00:53
8F：→ tynse71864: ,每個都去跑 WB看看結果 03/21 00:53
9F：→ Ianthegood: 鍵盤抓蟲看看 如果最上面的2ml跟total lysate差不多可 03/21 02:13
10F：→ Ianthegood: 能是gradient被破壞掉了 你上ultra之前的gradient還 03/21 02:14
11F：→ Ianthegood: 完整嗎? 03/21 02:14