作者hachibuya (黄金骑士 牙狼)
看板Biotech
标题[求救] 有人做过lysosome fraction isolation吗
时间Mon Mar 20 22:46:07 2017
我使用ThermoFisher的kit
Lysosome isolation kit from tissue and cultured cells
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/89839
试着分离MDA-MB-231乳癌细胞的lysosome
结果分离出来的东西做WB和total cell lysate有八七成像
表示分离完全失败
我遇到的一个问题是说明书上的范例使用A431 cell
lysate完是乳白色液体 超离心後会有很明显的分层
http://i.imgur.com/NwQwo8H.jpg
但是我的cell lysate是透明的 离完心全部都是透明的
我只好假装有分层取最上层2ml的液体来分析
结果是失败的
不知道有没有人有经验能帮帮我的
感激不尽
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1F：→ Ianthegood: 没用过随便问XD 你的gradient怎麽叠的? 03/20 22:55
2F：→ hachibuya: 就照说明书上的30% 27% 23% 20% 17%这样叠, 但上面也 03/20 22:57
3F：→ hachibuya: 注明浓度可能会依细胞不同有所不同 我会再查看看 03/20 22:59
4F：→ hachibuya: cell lysate是15%叠在最上面 03/20 23:00
5F：推 tynse71864: 1.细胞怎麽破的 2.lysate乳白色应该是胞内lipidor高 03/21 00:48
6F：→ tynse71864: 浓度蛋白 细胞下多少呢? 03/21 00:48
7F：→ tynse71864: 如果不确定分离效果 ，你可以把 gradient分 fraction 03/21 00:53
8F：→ tynse71864: ,每个都去跑 WB看看结果 03/21 00:53
9F：→ Ianthegood: 键盘抓虫看看 如果最上面的2ml跟total lysate差不多可 03/21 02:13
10F：→ Ianthegood: 能是gradient被破坏掉了 你上ultra之前的gradient还 03/21 02:14
11F：→ Ianthegood: 完整吗? 03/21 02:14