作者knowledge265 (lonelyvenice)
看板Biotech
標題不同dish下藥後沒效果
時間Mon Feb 27 14:54:38 2017
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
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我們實驗室本身是在做加藥實驗,一開始以24well篩IC50,seed細胞是30000cell/well
大約是0.5 uM左右,在收western用的cell lysate時候是用6well,細胞按照dish
底面積去換算,量大概是1.5x10^5,用IC50s用IC50濃度去做也有效,但是最近想收10cm
dish,seed按照底面積換算大概要9x10^5,但是結果完全沒有死,於是我又降了細胞數在
6x10^5也是沒有明顯效果,請問一下這種情況還要降細胞數嗎??又或是劑量不足
24well 劑量用1ml
6well 劑量用3ml
10 cm 劑量用8ml(一般細胞繼代大概都是8ml長2天們問題)
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1F：→ a90648: 劑量是指除了medium又分別加加了1,3,8 ml的藥進去? 02/27 15:10
2F：→ knowledge265: 我的意思是 medium共1,3,8ml而當中已經包含藥了 02/27 16:03
3F：→ xxtomnyxx: 24 well 用 1 mL？底面積換算這樣 10cm 應該要 29 mL耶 02/27 17:14
4F：→ a90648: 嗯!! 知道了 那藥的stock濃度是多少呢 02/27 17:15
5F：→ a90648: 加藥的方式是用medium稀釋藥物最後總體積是8ml 02/27 17:17
6F：→ a90648: 還是8ml medium再加入藥物進去? 02/27 17:18
7F：推 tz2733: 藥是固定濃度配成Medium後 不同面積的dish加不同體積(量) 02/27 18:02
8F：→ tz2733: 的medium 這樣嗎? 然後細胞數是依照面積等比例放大數量 02/27 18:02
9F：→ tz2733: 這樣詮釋有對嗎? 02/27 18:02
10F：→ knowledge265: 回tz大 沒錯 就是這樣 02/27 18:16
11F：→ knowledge265: 回a906 stock是10mM 用之前會先取一點出來稀釋成1mM 02/27 18:18
12F：→ a90648: 依照目前敘述只能推測是不是藥壞了? 02/27 18:21
13F：→ knowledge265: 確定藥沒有壞喔 因為有嘗試用24WELL重試 沒問題 02/27 19:11
14F：推 tz2733: 你放大面積的實驗過程 細胞數1x 5x 30x(or 20x) 藥品濃 02/27 21:13
15F：→ tz2733: 度相同 體積1 3 8ml 你算實際藥品的量(濃度x體積)出來 就 02/27 21:13
16F：→ tz2733: 會發現相對細胞數而言 藥品的量越來越不夠 (假設濃度為1 02/27 21:13
17F：→ tz2733: 則細胞比上藥品量1:1 5:3 30:8) 不知道我這樣想對不對 02/27 21:13
18F：→ tz2733: 給你參考 02/27 21:13
19F：→ xxtomnyxx: 我的建議同 tz 大 02/27 22:40
20F：→ blence: 樓樓上的說法當然不對阿 02/27 23:23
21F：→ blence: 如果那個解釋合理,那養細胞用的10%FBS,不就也是主要變因? 02/27 23:27
22F：→ Ianthegood: 可能管壁會bind藥? 再拿medium跑個hplc/elisa看看藥 02/27 23:41
23F：→ Ianthegood: 的濃度有沒跑掉 02/27 23:41
24F：推 Ianthegood: 確定三組用一模一樣的medium/drug mix會得到不一樣的 02/27 23:44
25F：→ Ianthegood: 結果? 用同一個batch? 02/27 23:44
26F：推 tz2733: 謝謝blence的指正 我腦袋打結想錯了... 02/28 07:29
27F：→ xxtomnyxx: 事實上以我養細胞的經驗，配好的一罐 10% FBS 的培養液 02/28 19:35
28F：→ xxtomnyxx: 同樣 10 cm dish，種相同的細胞相同的數量，用不同體積 02/28 19:35
29F：→ xxtomnyxx: 的培養液下去養，養出來的結果還真的會不太一樣，尤其 02/28 19:36
30F：→ xxtomnyxx: 是細胞數變 30 培養液體積卻只增加 10 倍這樣的狀況... 02/28 19:37
31F：→ xxtomnyxx: 應該是這麼說：你在 24 well 用 1 mL 培養液，到 10 cm 02/28 19:38
32F：→ xxtomnyxx: dish 上時你細胞數量用底面積去計算倍率，那加的培養液 02/28 19:39
33F：→ xxtomnyxx: 體積也應該要用底面積倍率去計算，不能當純用剛好蓋過 02/28 19:40
34F：→ xxtomnyxx: 細胞的量，不然這也會多產生出一個變因。 02/28 19:40
35F：→ blence: 液面高度影響溶氧量阿,所以medium加越多,反而長得變慢 02/28 22:25
36F：→ knowledge265: 所以10cm dish真的要用大量的medium的意思 03/01 13:01
37F：→ xxtomnyxx: 你可以用大體積試個幾次，如果IC50就正常了那就表示必 03/01 13:18
38F：→ xxtomnyxx: 須用這個體積做，如果你覺得太浪費 medium 就只好從 24 03/01 13:19
39F：→ xxtomnyxx: well 用比較少的體積重新開始測 IC50。 03/01 13:20
40F：→ xxtomnyxx: 另外，我是覺得 24 well 用到 1 mL 有點怪，24 well 建 03/01 13:20
41F：→ xxtomnyxx: 議體積一般是 0.5 mL 左右。 03/01 13:21
42F：推 tz2733: 細胞產的代謝物也會因medium˙量不同而有不同濃度呀~要考 03/01 15:43
43F：→ tz2733: 慮的點太多 原po乾脆用10cm作IC50實驗或收30格24well好了> 03/01 15:43
44F：→ tz2733: <(比較可行的可能是多收幾個6well啦~) 03/01 15:43