作者knowledge265 (lonelyvenice)
看板Biotech
标题不同dish下药後没效果
时间Mon Feb 27 14:54:38 2017
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
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我们实验室本身是在做加药实验,一开始以24well筛IC50,seed细胞是30000cell/well
大约是0.5 uM左右,在收western用的cell lysate时候是用6well,细胞按照dish
底面积去换算,量大概是1.5x10^5,用IC50s用IC50浓度去做也有效,但是最近想收10cm
dish,seed按照底面积换算大概要9x10^5,但是结果完全没有死,於是我又降了细胞数在
6x10^5也是没有明显效果,请问一下这种情况还要降细胞数吗??又或是剂量不足
24well 剂量用1ml
6well 剂量用3ml
10 cm 剂量用8ml(一般细胞继代大概都是8ml长2天们问题)
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1F：→ a90648: 剂量是指除了medium又分别加加了1,3,8 ml的药进去? 02/27 15:10
2F：→ knowledge265: 我的意思是 medium共1,3,8ml而当中已经包含药了 02/27 16:03
3F：→ xxtomnyxx: 24 well 用 1 mL？底面积换算这样 10cm 应该要 29 mL耶 02/27 17:14
4F：→ a90648: 嗯!! 知道了 那药的stock浓度是多少呢 02/27 17:15
5F：→ a90648: 加药的方式是用medium稀释药物最後总体积是8ml 02/27 17:17
6F：→ a90648: 还是8ml medium再加入药物进去? 02/27 17:18
7F：推 tz2733: 药是固定浓度配成Medium後 不同面积的dish加不同体积(量) 02/27 18:02
8F：→ tz2733: 的medium 这样吗? 然後细胞数是依照面积等比例放大数量 02/27 18:02
9F：→ tz2733: 这样诠释有对吗? 02/27 18:02
10F：→ knowledge265: 回tz大 没错 就是这样 02/27 18:16
11F：→ knowledge265: 回a906 stock是10mM 用之前会先取一点出来稀释成1mM 02/27 18:18
12F：→ a90648: 依照目前叙述只能推测是不是药坏了? 02/27 18:21
13F：→ knowledge265: 确定药没有坏喔 因为有尝试用24WELL重试 没问题 02/27 19:11
14F：推 tz2733: 你放大面积的实验过程 细胞数1x 5x 30x(or 20x) 药品浓 02/27 21:13
15F：→ tz2733: 度相同 体积1 3 8ml 你算实际药品的量(浓度x体积)出来 就 02/27 21:13
16F：→ tz2733: 会发现相对细胞数而言 药品的量越来越不够 (假设浓度为1 02/27 21:13
17F：→ tz2733: 则细胞比上药品量1:1 5:3 30:8) 不知道我这样想对不对 02/27 21:13
18F：→ tz2733: 给你参考 02/27 21:13
19F：→ xxtomnyxx: 我的建议同 tz 大 02/27 22:40
20F：→ blence: 楼楼上的说法当然不对阿 02/27 23:23
21F：→ blence: 如果那个解释合理,那养细胞用的10%FBS,不就也是主要变因? 02/27 23:27
22F：→ Ianthegood: 可能管壁会bind药? 再拿medium跑个hplc/elisa看看药 02/27 23:41
23F：→ Ianthegood: 的浓度有没跑掉 02/27 23:41
24F：推 Ianthegood: 确定三组用一模一样的medium/drug mix会得到不一样的 02/27 23:44
25F：→ Ianthegood: 结果? 用同一个batch? 02/27 23:44
26F：推 tz2733: 谢谢blence的指正 我脑袋打结想错了... 02/28 07:29
27F：→ xxtomnyxx: 事实上以我养细胞的经验，配好的一罐 10% FBS 的培养液 02/28 19:35
28F：→ xxtomnyxx: 同样 10 cm dish，种相同的细胞相同的数量，用不同体积 02/28 19:35
29F：→ xxtomnyxx: 的培养液下去养，养出来的结果还真的会不太一样，尤其 02/28 19:36
30F：→ xxtomnyxx: 是细胞数变 30 培养液体积却只增加 10 倍这样的状况... 02/28 19:37
31F：→ xxtomnyxx: 应该是这麽说：你在 24 well 用 1 mL 培养液，到 10 cm 02/28 19:38
32F：→ xxtomnyxx: dish 上时你细胞数量用底面积去计算倍率，那加的培养液 02/28 19:39
33F：→ xxtomnyxx: 体积也应该要用底面积倍率去计算，不能当纯用刚好盖过 02/28 19:40
34F：→ xxtomnyxx: 细胞的量，不然这也会多产生出一个变因。 02/28 19:40
35F：→ blence: 液面高度影响溶氧量阿,所以medium加越多,反而长得变慢 02/28 22:25
36F：→ knowledge265: 所以10cm dish真的要用大量的medium的意思 03/01 13:01
37F：→ xxtomnyxx: 你可以用大体积试个几次，如果IC50就正常了那就表示必 03/01 13:18
38F：→ xxtomnyxx: 须用这个体积做，如果你觉得太浪费 medium 就只好从 24 03/01 13:19
39F：→ xxtomnyxx: well 用比较少的体积重新开始测 IC50。 03/01 13:20
40F：→ xxtomnyxx: 另外，我是觉得 24 well 用到 1 mL 有点怪，24 well 建 03/01 13:20
41F：→ xxtomnyxx: 议体积一般是 0.5 mL 左右。 03/01 13:21
42F：推 tz2733: 细胞产的代谢物也会因medium˙量不同而有不同浓度呀~要考 03/01 15:43
43F：→ tz2733: 虑的点太多 原po乾脆用10cm作IC50实验或收30格24well好了> 03/01 15:43
44F：→ tz2733: <(比较可行的可能是多收几个6well啦~) 03/01 15:43