作者kaofei (phoebe)
看板Biotech
標題[求救] 想請教BL21(DE3)pLysS這個菌株
時間Mon Dec 26 18:50:41 2016
有人有用過嗎？
我想clone一段5600 bp左右的序列到pJET vector，然後轉型到top10擴增
但這段gene好像有toxic sequence，菌都長很差不然就是insert錯誤
試過室溫培養感覺效果沒甚麼改善QQ
所以想試試看別的細菌Strain
查資料看到BL21(DE3)pLysS好像可以耐toxic sequence
用他似乎可行？
然後我不是要做蛋白質表現的，純粹是Clone以後收藏起來
不知道有沒有人有類似經驗的可以提點一下orz，謝謝！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.208
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※ 編輯: kaofei (140.112.4.208), 12/26/2016 18:51:12
1F：→ storm780121: 印象是c41 c43吧？雖然他們主要不是保存質體用的…另 12/26 20:12
2F：→ storm780121: 外想問你的vector是哪個呢？ 12/26 20:12
3F：→ storm780121: 阿 沒事 當我沒問 哈哈 12/26 20:14
4F：推 biingru: 要注意有沒有 recA knockout 否則會重組 promotor 12/27 00:47
5F：→ biingru: 不建議用BL21(DE3)當insert保存 12/27 00:48
6F：→ blence: top10跟DH10B像,可以用來保存這大小的vector 12/27 06:28
7F：→ blence: 而且你的vector可能也沒有可在top10表現的promoter 12/27 06:31
8F：→ blence: sequence很不穩定機率大,而可能不是表現出來有毒 12/27 06:35
※ 編輯: kaofei (140.112.4.192), 12/27/2016 11:28:07
9F：→ kaofei: 回bilingru，為什麼不建議呢？如果有pLyss？還沒很懂這些 12/27 11:32
10F：→ kaofei: 細菌的strain的差異... 12/27 11:32
11F：→ kaofei: 回blence：會說有毒是看其他paper說的(研究同個virus) 12/27 11:34
12F：→ kaofei: 那想請問如果sequence不穩定，有甚麼方法可以克服嗎？ 12/27 11:34
13F：→ Ianthegood: 看不太懂，你如果只是要收plasmid當然盡量不要進 12/27 19:46
14F：→ Ianthegood: expression strain啊, dh5a, dh10b, xlgold這些先試吧 12/27 19:47
15F：推 silverberry: 保存載體不建議放到表現菌株。請選用I大推薦的載體 12/28 06:37
16F：→ silverberry: 保存菌株來做clone吧 12/28 06:37