作者kaofei (phoebe)
看板Biotech
标题[求救] 想请教BL21(DE3)pLysS这个菌株
时间Mon Dec 26 18:50:41 2016
有人有用过吗？
我想clone一段5600 bp左右的序列到pJET vector，然後转型到top10扩增
但这段gene好像有toxic sequence，菌都长很差不然就是insert错误
试过室温培养感觉效果没甚麽改善QQ
所以想试试看别的细菌Strain
查资料看到BL21(DE3)pLysS好像可以耐toxic sequence
用他似乎可行？
然後我不是要做蛋白质表现的，纯粹是Clone以後收藏起来
不知道有没有人有类似经验的可以提点一下orz，谢谢！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.4.208
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1482749443.A.51B.html
※ 编辑: kaofei (140.112.4.208), 12/26/2016 18:51:12
1F：→ storm780121: 印象是c41 c43吧？虽然他们主要不是保存质体用的…另 12/26 20:12
2F：→ storm780121: 外想问你的vector是哪个呢？ 12/26 20:12
3F：→ storm780121: 阿 没事 当我没问 哈哈 12/26 20:14
4F：推 biingru: 要注意有没有 recA knockout 否则会重组 promotor 12/27 00:47
5F：→ biingru: 不建议用BL21(DE3)当insert保存 12/27 00:48
6F：→ blence: top10跟DH10B像,可以用来保存这大小的vector 12/27 06:28
7F：→ blence: 而且你的vector可能也没有可在top10表现的promoter 12/27 06:31
8F：→ blence: sequence很不稳定机率大,而可能不是表现出来有毒 12/27 06:35
※ 编辑: kaofei (140.112.4.192), 12/27/2016 11:28:07
9F：→ kaofei: 回bilingru，为什麽不建议呢？如果有pLyss？还没很懂这些 12/27 11:32
10F：→ kaofei: 细菌的strain的差异... 12/27 11:32
11F：→ kaofei: 回blence：会说有毒是看其他paper说的(研究同个virus) 12/27 11:34
12F：→ kaofei: 那想请问如果sequence不稳定，有甚麽方法可以克服吗？ 12/27 11:34
13F：→ Ianthegood: 看不太懂，你如果只是要收plasmid当然尽量不要进 12/27 19:46
14F：→ Ianthegood: expression strain啊, dh5a, dh10b, xlgold这些先试吧 12/27 19:47
15F：推 silverberry: 保存载体不建议放到表现菌株。请选用I大推荐的载体 12/28 06:37
16F：→ silverberry: 保存菌株来做clone吧 12/28 06:37