作者sharone75 (wei)
看板Biotech
標題transfection做法
時間Sun Dec 18 14:52:54 2016
碩一時常使用CaCl2做轉染6well
但現在碩二突然做不出來了
試了十幾次都找不到原因
同樣條件實驗室學弟做就沒問題
想問看看有沒有人也是用磷酸鈣沉澱做轉染
可不可以教我
謝謝
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1F：→ lail: reagent跟DNA或細胞都跟學弟的一樣嗎（同一管試劑或同一株 12/18 16:58
2F：→ lail: 細胞？）？跟一年級用的細胞一樣嗎？ 12/18 16:58
3F：→ sharone75: 是的，細胞都是我種的293,試劑我配的，DNA我抽的，只 12/18 17:40
4F：→ sharone75: 是我我有一格給他做 12/18 17:40
5F：→ xxtomnyxx: 我覺得 CaCl2 transfection 真的是一個很神奇的技術， 12/18 20:49
6F：→ xxtomnyxx: 我用網路上的方法從來沒做出來，反而改成一個莫名其妙 12/18 20:50
7F：→ xxtomnyxx: 的方法後突然就可以了，然而過一陣子後又做不出來，這 12/18 20:50
8F：→ xxtomnyxx: 時再換回網路上的方法突然又可以了...... 12/18 20:51
9F：→ sharone75: 原來也有同道中人，我現在超崩潰我要趕畢業了RRR 12/18 20:53
10F：→ xxtomnyxx: 最後一次用的成功的方法是 DNA/CaCl2 混合，加到 2xHBS 12/18 21:57
11F：→ xxtomnyxx: 裡，立刻混合，不用打泡泡，靜置 25 分鐘後均勻的灑在 12/18 21:59
12F：→ xxtomnyxx: 養細胞的盤子上，灑完後「不要搖勻培養液」！ 12/18 21:59
13F：→ xxtomnyxx: 可是有個問題是沒灑到的地方的細胞就幾乎不會成功... 12/18 22:00
14F：→ sharone75: 我不知道打泡泡是什麼，但我是用votex震出旋渦，再滴 12/18 22:05
15F：→ sharone75: 進去 12/18 22:05
16F：→ lail: 那我建議你問一下學弟的手法好了，真是太神奇了（我自己還沒 12/19 20:03
17F：→ lail: 遇過這種狀況） 12/19 20:03
18F：→ lail: 我以前是左手使用1ml 塑膠pippet打泡泡（一直排氣），右手 12/19 20:05
19F：→ lail: 用pippetment慢慢滴入另一個溶劑（太久沒做忘記兩種溶液名 12/19 20:05
20F：→ lail: 稱，抱歉） 12/19 20:05
21F：→ blence: CaCl2跟2xHBS在一起會產生沈澱,所以我都先把DNA加到2xHBS 12/19 21:17
22F：→ blence: 以vortex混合數秒,再慢慢滴入CaCl2,讓沈澱物會比較細小 12/19 21:24
23F：→ blence: 混合後靜至1分鐘就直接加入medium,隔天有細小沈澱就算良好 12/19 21:27
24F：→ blence: 另外,比較麻煩的習慣是CaCl2總是新配再過濾 12/19 21:30
25F：→ sharone75: 從我失敗開始我學弟都會看我做，老闆也知道，可是還是 12/20 09:35
26F：→ sharone75: .... 12/20 09:35
27F：→ sharone75: 我們也是每次重配 12/20 09:41
28F：→ sharone75: 我家是DNA+cacl2混勻，滴hbs進去 12/20 09:47