作者sharone75 (wei)
看板Biotech
标题transfection做法
时间Sun Dec 18 14:52:54 2016
硕一时常使用CaCl2做转染6well
但现在硕二突然做不出来了
试了十几次都找不到原因
同样条件实验室学弟做就没问题
想问看看有没有人也是用磷酸钙沉淀做转染
可不可以教我
谢谢
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1F：→ lail: reagent跟DNA或细胞都跟学弟的一样吗（同一管试剂或同一株 12/18 16:58
2F：→ lail: 细胞？）？跟一年级用的细胞一样吗？ 12/18 16:58
3F：→ sharone75: 是的，细胞都是我种的293,试剂我配的，DNA我抽的，只 12/18 17:40
4F：→ sharone75: 是我我有一格给他做 12/18 17:40
5F：→ xxtomnyxx: 我觉得 CaCl2 transfection 真的是一个很神奇的技术， 12/18 20:49
6F：→ xxtomnyxx: 我用网路上的方法从来没做出来，反而改成一个莫名其妙 12/18 20:50
7F：→ xxtomnyxx: 的方法後突然就可以了，然而过一阵子後又做不出来，这 12/18 20:50
8F：→ xxtomnyxx: 时再换回网路上的方法突然又可以了...... 12/18 20:51
9F：→ sharone75: 原来也有同道中人，我现在超崩溃我要赶毕业了RRR 12/18 20:53
10F：→ xxtomnyxx: 最後一次用的成功的方法是 DNA/CaCl2 混合，加到 2xHBS 12/18 21:57
11F：→ xxtomnyxx: 里，立刻混合，不用打泡泡，静置 25 分钟後均匀的洒在 12/18 21:59
12F：→ xxtomnyxx: 养细胞的盘子上，洒完後「不要摇匀培养液」！ 12/18 21:59
13F：→ xxtomnyxx: 可是有个问题是没洒到的地方的细胞就几乎不会成功... 12/18 22:00
14F：→ sharone75: 我不知道打泡泡是什麽，但我是用votex震出旋涡，再滴 12/18 22:05
15F：→ sharone75: 进去 12/18 22:05
16F：→ lail: 那我建议你问一下学弟的手法好了，真是太神奇了（我自己还没 12/19 20:03
17F：→ lail: 遇过这种状况） 12/19 20:03
18F：→ lail: 我以前是左手使用1ml 塑胶pippet打泡泡（一直排气），右手 12/19 20:05
19F：→ lail: 用pippetment慢慢滴入另一个溶剂（太久没做忘记两种溶液名 12/19 20:05
20F：→ lail: 称，抱歉） 12/19 20:05
21F：→ blence: CaCl2跟2xHBS在一起会产生沈淀,所以我都先把DNA加到2xHBS 12/19 21:17
22F：→ blence: 以vortex混合数秒,再慢慢滴入CaCl2,让沈淀物会比较细小 12/19 21:24
23F：→ blence: 混合後静至1分钟就直接加入medium,隔天有细小沈淀就算良好 12/19 21:27
24F：→ blence: 另外,比较麻烦的习惯是CaCl2总是新配再过滤 12/19 21:30
25F：→ sharone75: 从我失败开始我学弟都会看我做，老板也知道，可是还是 12/20 09:35
26F：→ sharone75: .... 12/20 09:35
27F：→ sharone75: 我们也是每次重配 12/20 09:41
28F：→ sharone75: 我家是DNA+cacl2混匀，滴hbs进去 12/20 09:47