作者kamisu (red)
看板Biotech
標題[求救] 小鼠肺部冷凍包埋及切片
時間Mon Jul 11 00:33:26 2016
各位研究先進大家好，小妹最近開始做小鼠肺部的冷凍包埋切片，遇到了一些問題，希望
各位不
吝給我指教和意見：）
我的步驟為：將肺部剪下後浸入OCT中（沒有灌流），靜置約2小時，再放入-80冰箱保存
，直到
要切片時將他們放入液態氮中拿到切片機所在的地方，預計切的厚度為5 um，但每次切到
組織就
會破，無法切出完整的切片，就算調到10 um也是一樣。
我有幾個疑問：
1. 是不是需要先灌OCT到肺部？需要稀釋嗎？要灌多久？
2. 冷凍包埋之後如果不以液態氮攜帶就會溶掉，溶掉的話對組織會有影響嗎？
3. 破片的原因是因為OCT沒有進到肺泡裡嗎？
4. 肺部冷凍切片有可能切到3 um嗎？
跪求大家回答我很蠢的問題～～真的切不出來都要瘋了～～～
爬文了一下看到很多切腦組織的，但是組織不同應該也不能follow...
謝謝大家！
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1F：推 YuChHa: 切片溫度太低吧! 調高一點. 07/11 01:34
2F：推 tz2733: 1.有聽過先全身灌流PFA固定或取組織出來後以溶液(糖溶液 07/11 09:21
3F：→ tz2733: 之類)浸泡處理置換水份 沒聽過灌OCT.....建議找paper看 2. 07/11 09:21
4F：→ tz2733: 蛋白質在不同溫度來回會有變化吧....一定要避免呀~ 07/11 09:21
5F：推 eric2853: 我會先用30%蔗糖置換1天在泡OCT 07/11 09:52
6F：→ tchan: 如上面各位建議，先泡30％sucrose脫水一天就會變得很好切! 07/11 10:14
7F：推 osla30: 要泡到它沉下去 07/11 11:33
8F：→ kamisu: 請問Yuchta大 切片機的溫度應該幾度比較適當呢？我是調-25 07/11 11:57
9F：→ kamisu: 謝謝樓上幾位的回覆！我會試試看用30%蔗糖脫水後再泡OCT! 07/11 11:59
10F：→ YuChHa: 你可以在可以試的狀況下試 -25~ -15 (都切幾片試試看) 07/11 20:38
11F：→ YuChHa: 每個組織的適合溫度都不太一樣 差幾度切起來真的有差! 07/11 20:39
12F：→ eric2853: -25對於肺臟來說好像太低了一點 我都調22左右～ 07/11 21:42
13F：→ kamisu: 感謝經驗分享！我會調整溫度試試看！：） 07/12 01:19
14F：推 homeshawn: 不脫水直接凍切@@? 07/12 09:46
15F：→ kamisu: 嗯……對…完全新手 T^T 07/12 23:13
16F：推 greendeer: 你要凍OCT要快啦，不能放在-80，冰晶一定是慢慢形成 07/21 15:36
17F：→ greendeer: ，你的組織當然破碎呀 07/21 15:36
18F：→ greendeer: 3 micron可能要用塑膠切片了 07/21 15:37