作者kamisu (red)
看板Biotech
标题[求救] 小鼠肺部冷冻包埋及切片
时间Mon Jul 11 00:33:26 2016
各位研究先进大家好，小妹最近开始做小鼠肺部的冷冻包埋切片，遇到了一些问题，希望
各位不
吝给我指教和意见：）
我的步骤为：将肺部剪下後浸入OCT中（没有灌流），静置约2小时，再放入-80冰箱保存
，直到
要切片时将他们放入液态氮中拿到切片机所在的地方，预计切的厚度为5 um，但每次切到
组织就
会破，无法切出完整的切片，就算调到10 um也是一样。
我有几个疑问：
1. 是不是需要先灌OCT到肺部？需要稀释吗？要灌多久？
2. 冷冻包埋之後如果不以液态氮携带就会溶掉，溶掉的话对组织会有影响吗？
3. 破片的原因是因为OCT没有进到肺泡里吗？
4. 肺部冷冻切片有可能切到3 um吗？
跪求大家回答我很蠢的问题～～真的切不出来都要疯了～～～
爬文了一下看到很多切脑组织的，但是组织不同应该也不能follow...
谢谢大家！
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1F：推 YuChHa: 切片温度太低吧! 调高一点. 07/11 01:34
2F：推 tz2733: 1.有听过先全身灌流PFA固定或取组织出来後以溶液(糖溶液 07/11 09:21
3F：→ tz2733: 之类)浸泡处理置换水份 没听过灌OCT.....建议找paper看 2. 07/11 09:21
4F：→ tz2733: 蛋白质在不同温度来回会有变化吧....一定要避免呀~ 07/11 09:21
5F：推 eric2853: 我会先用30%蔗糖置换1天在泡OCT 07/11 09:52
6F：→ tchan: 如上面各位建议，先泡30％sucrose脱水一天就会变得很好切! 07/11 10:14
7F：推 osla30: 要泡到它沉下去 07/11 11:33
8F：→ kamisu: 请问Yuchta大 切片机的温度应该几度比较适当呢？我是调-25 07/11 11:57
9F：→ kamisu: 谢谢楼上几位的回覆！我会试试看用30%蔗糖脱水後再泡OCT! 07/11 11:59
10F：→ YuChHa: 你可以在可以试的状况下试 -25~ -15 (都切几片试试看) 07/11 20:38
11F：→ YuChHa: 每个组织的适合温度都不太一样 差几度切起来真的有差! 07/11 20:39
12F：→ eric2853: -25对於肺脏来说好像太低了一点 我都调22左右～ 07/11 21:42
13F：→ kamisu: 感谢经验分享！我会调整温度试试看！：） 07/12 01:19
14F：推 homeshawn: 不脱水直接冻切@@? 07/12 09:46
15F：→ kamisu: 嗯……对…完全新手 T^T 07/12 23:13
16F：推 greendeer: 你要冻OCT要快啦，不能放在-80，冰晶一定是慢慢形成 07/21 15:36
17F：→ greendeer: ，你的组织当然破碎呀 07/21 15:36
18F：→ greendeer: 3 micron可能要用塑胶切片了 07/21 15:37