作者baal90317 (夢夢夢夢想家)
看板Biotech
標題[求救] 抽RNA濃度很低
時間Thu Jun 23 13:39:40 2016
最近實驗抽的RNA 測出來的濃度都很低 <10ng/ul
請問比較可能的原因是細胞數不夠嗎 還是RNA降解 或是抽取方法有誤?
情況: 我大概有24個sample種細胞
(種在sacffold上 所以不太好確定種上去的數量 只能控制下的細胞 大概40萬顆/個)
然後抽完RNA去量nanodrop 發現先種的11組濃度都低於10ng/ul
後種的的13組全都大於50ng/ul 260/280 , 260/230值也好看
而且嚴格說來都是同時種的 同一次實驗 只是下細胞的順序分為先下和後下
而後下的都是實驗組 所以我不太知道原因 請問有人能解惑一下嗎?
(而第二次抽完 發現全部都低於 10ng/ul QQ)
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1F：→ blence: 說一下吧，不然會認為溶在1ml裡面濃度當然少 06/23 13:49
2F：推 hitmd: 用什麼方法抽？ 06/23 16:12
3F：→ baal90317: 用kit抽的，溶在30ul的rnase free water裡 06/23 22:16
4F：→ xxtomnyxx: 下了 4e5 的細胞後養多久收？用哪牌的 Kit 抽的？有沒 06/23 22:39
5F：→ xxtomnyxx: 做均質化(homogeneous)？有沒有做 DNase 處理？ 06/23 22:40
6F：推 hitmd: 方法寫越詳細，版友越好幫你喔 06/24 12:42
7F：→ baal90317: 下完一天後收細胞，廠牌是zymo的miniprep,上述的處理 06/24 19:04
8F：→ baal90317: 都沒有做 06/24 19:04
9F：→ xxtomnyxx: 你把 lysate 填到 gDNA column 時你的 lysate 是不是很 06/24 20:03
10F：→ xxtomnyxx: 黏稠不像一般的流體？過完 gDNA column 後加酒精有沒有 06/24 20:03
11F：→ xxtomnyxx: 把溶液混合均勻？有沉澱物的話沉澱物也要一起放到 RNA 06/24 20:04
12F：→ xxtomnyxx: column 上。 06/24 20:04
13F：推 ararthur: 低於10的 先確定不是鹽類或蛋白peak的尾巴蓋到A260 06/26 00:25
14F：→ ararthur: 可能真的只是雜訊 06/26 00:25
15F：→ ararthur: 我覺得是抽RNA有問題 那幾組根本沒抽到 06/26 00:26