作者baal90317 (梦梦梦梦想家)
看板Biotech
标题[求救] 抽RNA浓度很低
时间Thu Jun 23 13:39:40 2016
最近实验抽的RNA 测出来的浓度都很低 <10ng/ul
请问比较可能的原因是细胞数不够吗 还是RNA降解 或是抽取方法有误?
情况: 我大概有24个sample种细胞
(种在sacffold上 所以不太好确定种上去的数量 只能控制下的细胞 大概40万颗/个)
然後抽完RNA去量nanodrop 发现先种的11组浓度都低於10ng/ul
後种的的13组全都大於50ng/ul 260/280 , 260/230值也好看
而且严格说来都是同时种的 同一次实验 只是下细胞的顺序分为先下和後下
而後下的都是实验组 所以我不太知道原因 请问有人能解惑一下吗?
(而第二次抽完 发现全部都低於 10ng/ul QQ)
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1F：→ blence: 说一下吧，不然会认为溶在1ml里面浓度当然少 06/23 13:49
2F：推 hitmd: 用什麽方法抽？ 06/23 16:12
3F：→ baal90317: 用kit抽的，溶在30ul的rnase free water里 06/23 22:16
4F：→ xxtomnyxx: 下了 4e5 的细胞後养多久收？用哪牌的 Kit 抽的？有没 06/23 22:39
5F：→ xxtomnyxx: 做均质化(homogeneous)？有没有做 DNase 处理？ 06/23 22:40
6F：推 hitmd: 方法写越详细，版友越好帮你喔 06/24 12:42
7F：→ baal90317: 下完一天後收细胞，厂牌是zymo的miniprep,上述的处理 06/24 19:04
8F：→ baal90317: 都没有做 06/24 19:04
9F：→ xxtomnyxx: 你把 lysate 填到 gDNA column 时你的 lysate 是不是很 06/24 20:03
10F：→ xxtomnyxx: 黏稠不像一般的流体？过完 gDNA column 後加酒精有没有 06/24 20:03
11F：→ xxtomnyxx: 把溶液混合均匀？有沉淀物的话沉淀物也要一起放到 RNA 06/24 20:04
12F：→ xxtomnyxx: column 上。 06/24 20:04
13F：推 ararthur: 低於10的 先确定不是盐类或蛋白peak的尾巴盖到A260 06/26 00:25
14F：→ ararthur: 可能真的只是杂讯 06/26 00:25
15F：→ ararthur: 我觉得是抽RNA有问题 那几组根本没抽到 06/26 00:26