作者chousai (塞塞)
看板Biotech
標題[求救] HeLa S3細胞於孔盤中的貼附問題
時間Wed Jun 22 23:26:36 2016
（手機排版，可能造成閱讀不便請見諒）
各位好！
我最近在做利用HeLa S3細胞感染CVB3然後用病毒斑減少分析法的方式來測試我懂目標樣品是否可以抑制病毒的效果，步驟大致為：
將一定數量的細胞種到6孔盤中培養24hr,吸除培養基後加入一定量的病毒液及測試樣品並於4度C環境中使病毒貼附1hr，之後加入覆蓋培養基於37度C、5%CO2中培養48hr
許多文獻中都說明他們在做此實驗時加完覆蓋培養基會培養72hr，但是根據我做出來的結果發現若是培養72hr，細胞最後都不會貼附在孔盤中，所以將方法改為培養48hr。
但是我除了病毒斑減少分析法之外也利用MTT assay的方式來檢測樣品對於抑制病毒的效果，步驟大致如下：
將一定量細胞種進96孔盤中培養24hr，吸除培養基後加入一定量的病毒液及測試樣品並於37度C、5%CO2中培養72hr，之後在利用MTT試劑來測細胞存活率
在這2種實驗方法下，病毒斑減少分析法的結果看起來測試樣品是沒有作用的，但是若是使用MTT assay則會有良好的效果。
目前猜測可能我的樣品對於病毒的抑制是在第二天到第三天之間，但是這樣我無法利用病毒斑的方式測得。
對了還有一點，我的細胞是養在Flask中，但如果經過3天沒有繼代的話，會開始有些微的細胞不貼附，若是放到4天則會有超多細胞都飄起來。
所以想請教大家，是不是在培養此株細胞的時候需要加點什麼試劑使他貼附較多或是有什麼樣的孔盤可以使較不易貼附的細胞貼附順利一點呢？（我用的孔盤為一般貼附型細胞的孔盤）
我所使用的medium都有依照食工所給的標準進行
拜託大家可以回答一下我的疑惑！！謝謝
拜託大家可以回答一下我的疑惑！！謝謝
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1F：→ Ice9: 拜託，都知道是手機排版了，為什麼不手動斷行。有閱讀障礙。06/23 03:25
2F：→ Ice9: S3本性就易浮，一般比較少用在貼附實驗上。48和72小時盤子有06/23 03:36
3F：→ Ice9: 多滿呢？（只操作過懸浮培養，無法給更多建議。）對了，養四06/23 03:39
4F：→ Ice9: 天中，medium換過幾次？06/23 03:40
在48和72小時都會將整個盤都種滿（無空隙），在falsk中養4天會飄是在沒有換medium的狀態下（因為真正在孔盤中也會放到4天而沒換培養基）
※ 編輯: chousai (180.217.239.8), 06/23/2016 09:35:36