作者chousai (塞塞)
看板Biotech
标题[求救] HeLa S3细胞於孔盘中的贴附问题
时间Wed Jun 22 23:26:36 2016
（手机排版，可能造成阅读不便请见谅）
各位好！
我最近在做利用HeLa S3细胞感染CVB3然後用病毒斑减少分析法的方式来测试我懂目标样品是否可以抑制病毒的效果，步骤大致为：
将一定数量的细胞种到6孔盘中培养24hr,吸除培养基後加入一定量的病毒液及测试样品并於4度C环境中使病毒贴附1hr，之後加入覆盖培养基於37度C、5%CO2中培养48hr
许多文献中都说明他们在做此实验时加完覆盖培养基会培养72hr，但是根据我做出来的结果发现若是培养72hr，细胞最後都不会贴附在孔盘中，所以将方法改为培养48hr。
但是我除了病毒斑减少分析法之外也利用MTT assay的方式来检测样品对於抑制病毒的效果，步骤大致如下：
将一定量细胞种进96孔盘中培养24hr，吸除培养基後加入一定量的病毒液及测试样品并於37度C、5%CO2中培养72hr，之後在利用MTT试剂来测细胞存活率
在这2种实验方法下，病毒斑减少分析法的结果看起来测试样品是没有作用的，但是若是使用MTT assay则会有良好的效果。
目前猜测可能我的样品对於病毒的抑制是在第二天到第三天之间，但是这样我无法利用病毒斑的方式测得。
对了还有一点，我的细胞是养在Flask中，但如果经过3天没有继代的话，会开始有些微的细胞不贴附，若是放到4天则会有超多细胞都飘起来。
所以想请教大家，是不是在培养此株细胞的时候需要加点什麽试剂使他贴附较多或是有什麽样的孔盘可以使较不易贴附的细胞贴附顺利一点呢？（我用的孔盘为一般贴附型细胞的孔盘）
我所使用的medium都有依照食工所给的标准进行
拜托大家可以回答一下我的疑惑！！谢谢
拜托大家可以回答一下我的疑惑！！谢谢
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1F：→ Ice9: 拜托，都知道是手机排版了，为什麽不手动断行。有阅读障碍。06/23 03:25
2F：→ Ice9: S3本性就易浮，一般比较少用在贴附实验上。48和72小时盘子有06/23 03:36
3F：→ Ice9: 多满呢？（只操作过悬浮培养，无法给更多建议。）对了，养四06/23 03:39
4F：→ Ice9: 天中，medium换过几次？06/23 03:40
在48和72小时都会将整个盘都种满（无空隙），在falsk中养4天会飘是在没有换medium的状态下（因为真正在孔盘中也会放到4天而没换培养基）
※ 编辑: chousai (180.217.239.8), 06/23/2016 09:35:36